糖原磷酸化酶b（GPb）微量法檢測試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品：免疫組化HRP－TMB底物顯色試劑盒 50次
免疫印跡HRP－TMB底物顯色試劑盒 10次
超敏型HRP－TMB底物顯色試劑盒 10/50次
通用型HRP－AEC底物顯色試劑盒 10次
增強型HRP－AEC底物顯色試劑盒 10次
AP－NPP底物顯色試劑盒 10次
操作步驟:
實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 100管/48樣 |
檢測方法 | 微量法 |
貨號 | GOY-01S6984 |
商品介紹：
測定意義
糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶，使糖原分子從非還原端逐個斷開α-1，4-糖苷鍵移去葡萄糖基，釋放1-磷酸葡萄糖，直至臨近糖原分子α-1，6-糖苷鍵分支點前4個葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和無活性的糖原磷酸化酶b（GPb）兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活。
測定原理：
GP催化糖原和無機磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH，在340nm下測定NADPH上升速率，即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）時測定GP（GPa和GPb）活性，未添加腺苷酸（5，-AMP）時測定GPa活性，GP活性－GPa活性得到GPb活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
實驗方法學：
一、肝素的配制： 市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。 肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集： 全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
L-天冬雙芐酯對甲苯磺酸鹽 98%氟甲基-1,1,1,3,3,3-六氟異基 98%Anti-PTPN4/MEG1/FITC 熒光素標記蛋白非受體型4抗體IgG
N-乙酰甘乙酯 98%N,N`-二苯基硫脲 CP,98%Anti-PPAR-delta /FITC 熒光素標記D型-過氧化活化增生受體抗體IgG
L- 98%基乙酸 99%Anti-PPAR alpha/FITC 熒光素標記α型-過氧化活化增生受體抗體IgG
(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡-3-氧基)三-1-吡咯烷基六氟鹽 0.98Anti-PPAR Gamma /FITC 熒光素標記過氧化活化增生受體γ抗體IgG
N-乙酰-L-脯 98%0.99Anti-PPIG/FITC 熒光素標記親環(huán)蛋白（親環(huán)素）PPIG抗體IgG
S-乙酰半胱鹽酸 99%乙酸異烯酯 99%Anti-PR/FITC 熒光素標記孕受體抗體IgG
L-2-丁酸 99%硫化鋅 99.99% metals basis,3.8-4.2μm,powderanti-pRb/p105-Rb /FITC 熒光素標記化成視網(wǎng)膜瘤抑癌蛋白抗體IgG
7--4-甲基 98% 二溴 99%Anti-PRCP/FITC 熒光素標記脯氨酰羧肽抗體IgG
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