公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產品名稱 | 豬腎細胞：PK-15 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0186 |
商品介紹：
名稱 豬腎細胞：PK-15 別稱PK(15); PK (15); PK 15; PK15; Porcine Kidney-15 種屬野豬 年齡（性別）成年 組織來源腎臟 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述PK-15細胞是由Stice·E建系于1955年；PK-15細胞是PK-1a細胞的克隆系，PK-15細胞可用于多種病毒的增值及特性研究。另外，電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，PK-15細胞內有C-型病毒顆粒存在，是研究C-型病毒的材料。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基MEM（ATCC改良)＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~12-25小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 PCSK2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
人 PGA4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 PGA4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 SLCO1B3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 SLCO1B3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 FTO 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 FTO 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 RHOA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
豬腎細胞：PK-15 5g 8- 羥基 8-Hydroxyquinoline 室溫干燥保存
10mL Orange-G/Blue Dye (6X,triple tracker,Ficoll based) Orange-G/Blue Dye (6X,triple tracker,Ficoll based) 常溫保存
100mL 超級培養(yǎng)基 Super LB Medium 4℃保存，其中成分二-20℃保存，有效期一年。
2 ug pBHGlox_E1,3Cre pBHGlox_E1,3Cre 低溫運輸，-20℃保存
50T 貓細小病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
20次 裂殖酵母化學感受態(tài)細胞制備試劑盒（無高效轉化液） S. pombe Chemical Competent Cell Preparation Kit 常溫
2 ug pENTR4-FLAG pENTR4-FLAG 低溫運輸，-20℃保存
500mL TBS-Tween-20 (TTBS),20X,in Classical TBS) TBS-Tween-20 (TTBS),20X,in Classical TBS) 常溫保存
FAM3A 胰衍生因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
MLK2/MAP3K10 絲裂原活化蛋白激3K10抗體 規(guī)格: 0.2mlNucleolin/C23 核仁蛋白C23抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Chicken IgG/Cy3 Cy3標記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
