細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
產(chǎn)品名稱 | 兔骨髓單核細(xì)胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細(xì)胞 |
貨號(hào) | GOY-01X0748 |
商品介紹：
名稱 兔骨髓單核細(xì)胞 2.組織來(lái)源：骨髓 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 兔骨髓單核細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓單核細(xì)胞是一種未成熟的單核細(xì)胞，在骨髓細(xì)胞中約占0.04%，被認(rèn)為是破骨細(xì)胞的前體細(xì)胞，較外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞得率高、全骨髓誘導(dǎo)法產(chǎn)生的破骨細(xì)胞數(shù)量多，純度高，較脾細(xì)胞誘導(dǎo)法分化效率高。骨髓單核細(xì)胞（BMMNCs）是從股骨或脛骨骨髓中分離提取出來(lái)的原代細(xì)胞，它屬干細(xì)胞類型。目前，大多數(shù)研究用淋巴細(xì)胞分離液分離提取骨髓單核細(xì)胞，最近也有采用免疫磁珠分離法分離骨髓單核細(xì)胞。 5.方法簡(jiǎn)介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨髓單核細(xì)胞采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： ()實(shí)驗(yàn)室分離的兔骨髓單核細(xì)胞經(jīng)CD68免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-Rb015 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)巨噬細(xì)胞樣 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 JAM-A / F11R ELISA配對(duì)抗體
人 Granulin / GRN / Progranulin ELISA配對(duì)抗體
人 COMP / TSP5 ELISA配對(duì)抗體
人 DKK3 / Dkk-3 / REIC ELISA配對(duì)抗體
人 vWF / von Willebrand Factor ELISA配對(duì)抗體
人 PD1 / PDCD1 / CD279 ELISA配對(duì)抗體
人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 ELISA配對(duì)抗體
人 CD157 / BST1 ELISA配對(duì)抗體
人 C
兔骨髓單核細(xì)胞KRG2/DDX11 角質(zhì)細(xì)胞生因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Acetyl-Histone H4(K16) 乙?；M蛋白H4(K16)抗體 0.1mlPhospho-ATP1A1(Ser23) 磷酸化鈉鉀ATP蛋白a1抗體 規(guī)格: 0.1ml
HPV18 E6 人類狀瘤毒18 E6抗體 規(guī)格: 0.2mlGPR71/T1R2 蛋白偶聯(lián)受體71抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-2 白介素2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-SHC(Tyr239/240) 磷酸化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Syncytin 1/HERV 合胞素1抗體 0.2ml
ATX2 脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)2型蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-TRADD(Ser299) 磷酸化瘤壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
1瓶 HFTF細(xì)胞株 HFTF 低溫運(yùn)輸和保存
50T 解脲支原體PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
100次 轉(zhuǎn)ESPES-Nos 基因植物PCR Mix （36S-EPSES-Nos 基因） Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
2 ug pE2F-TA-Luc pE2F-TA-Luc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
