選擇ELISA試劑盒應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟性全面評價。
產(chǎn)品名稱:鯽魚卵黃蛋白原(VTG)elisa試劑盒
英文名稱:Crucian Vitellogenin,VTG ELISA Kit
規(guī)格:48T/96T
保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。
有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清、細胞裂解液
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具有如下優(yōu)點:
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;
五、性價比非常好,節(jié)省實驗經(jīng)費。
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
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注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
棕櫚酸甲酯(分析標準品,≥99.0%(GC))HP1α/β (C7F11) Rabbit mAb硫酸博萊霉素
亞麻酸甲酯(標準品)GST (26H1) Mouse mAbN-甲基亞氨二酸
亞麻酸甲酯(10 mg/mL,基體:二)GST (91G1) Rabbit mAb二甲醋酸酯
十一酸甲酯(標準品)GST (91G1) Rabbit mAb1,6-己二二酸酯
十九酸甲酯(標準品)EpCAM (D1B3) Rabbit mAb2-(環(huán)己亞氨基)基
二酸(標準品)SirT3 (C73E3) Rabbit mAb1-基-1-環(huán)羧酸
D-異抗壞血酸(標準品)α-Synuclein Antibody (IF Preferred)2-羥基嘧啶
亞油酸(分析標準品,≥99.0%(GC))Bcl-2 (124) Mouse mAb (PE Conjuga)3,3,三氟酮酸酯
隱色結晶紫(標準品)Rpb1 CTD (4H8) Mouse mAb2--5-吡啶酸
月桂酸(分析標準品,>99.5%(GC))Atg5 Antibody叔丁基膦
神經(jīng)酸(分析標準品,≥99.0%(GC))Phospho-Rpb1 CTD (Thr4) (D7L9W) Rabbit mAb2-氟萘
十五烷酸(分析標準品,≥99.5%(GC))Atg7 Antibody2,2',4,4'-四溴聯(lián)
泛酸鈣一水合物(標準品)Atg7 Antibody奎寧單鹽酸鹽二水合物
山梨酸(標準品)MYPT1 Antibody2,6-二叔丁基-基酚
全氟辛酸(分析標準品, 用于環(huán)境分析)MYPT1 Antibody溴巴豆酸甲酯
正辛酸(分析標準品,≥99.9%(GC))DDX3 AntibodyN-(氨基基)甲基酸鹽 鹽酸鹽
酸(標準品)Radixin (C4G7) Rabbit mAb2-甲基酰氧基酸膽
蓖麻油酸(分析標準品,99%)Contactin-2 (D4M7G) Rabbit mAb全氟三丁
鯽魚卵黃蛋白原(VTG)elisa試劑盒六 99%核蛋白易位啟動子區(qū)域TPR抗體瓊脂糖 High resolution人膚蠅探針法熒光定量PCR試劑盒2-異基-4-甲基噻唑 98%核因子1X抗體G-418 硫酸鹽 potency: ≥650 μg per mg泰澤隱孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒3-甲基-1-丁硫 97%環(huán)指蛋白107抗體對羥基甲 AR,98%流產(chǎn)嗜衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒甜瓜 80%軸突生長誘向因子G1配體抗體對羥基甲 分析標準品,≥99%(GC)克羅諾桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒2-甲基庚酸 98%神經(jīng)前體細胞表達發(fā)育下調(diào)蛋白5抗體對羥基甲 CP新生隱球菌探針法熒光定量PCR試劑盒香草酸甲酯 99%軸突生長誘向因子4抗體對羥基甲 ≥97%短古柏線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒4-甲硫基-4-甲基-2-戊 99%γ-分泌酶組件蛋白NCLN抗體1,4-二羥基蒽醌 96%點狀古柏線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒4-甲基-4-巰基-2-戊 98%核受體蛋白NR2E3抗體硫酚 99%(劇品)貓嗜衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒
操作流程如下:
(1)僅用于科研待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。