培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

?

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

組織二胺氧化酶（DAO）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 PASE-7蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

通用型雞產(chǎn)蛋下降綜合征（EDS）基因檢測試劑盒  進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

植物過氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

PASE-6蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

調(diào)料乙酸激酶法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細(xì)菌NADP依賴性甘油醛-3-脫氫酶（NADP-Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase；NADP-GAPDH）活性光譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

PASE-5蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：25次

調(diào)料乙酸比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織單胺氧化酶（MAO）總活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 細(xì)胞PASE-5蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

通用型硫酸酶（rhodanase）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

PrimaCell™大鼠支氣管平滑肌細(xì)胞試劑盒規(guī)格1-溴-2-異丙分子式：199.09英文名稱：1- -2- ISO號(hào)：7073-94-1分子量： C9H11Br

十七烷咪唑啉分子式：英文名稱：Seventeen alkyl imidazoline號(hào)：分子量：

二砜分子式：218.27英文名稱：Two benzene號(hào)：127-63-9分子量： C12H10O2S； (C6H5)2

R-甲吡分子式：英文名稱：R- methyl pyridine號(hào)：分子量：

(S)-1-Boc-3-羥分子式：201.26英文名稱：(S) -1-Boc-3- hydroxy piperidine號(hào)：143900-44-1分子量： C10H19NO3

鄰氯三氯甲分子式：229.92英文名稱：Ortho chlorine three號(hào)：2136-89-2分子量： C7H4Cl4

硬脂酰分子式：298.51英文名稱：Stearic acid號(hào)：4130-54-5分子量： C18H38N2O

1,3-雙(2,6-二異丙)氯咪唑鎓分子式：425.06英文名稱：1,3- (double 2,6- two isopropyl phenyl) imidazolium chloride號(hào)：250285-32-6分子量： C27H37ClN2

紫草素英文名稱：Shikonin分子式：288.3分子量：C16H16O5號(hào)：517-89-5

5-溴-2-嘧分子式：284.88英文名稱：5- -2- iodide號(hào)：183438-24-6分子量： C4H2BrIN2

比林英文名稱：Aminopyrine分子式：231.29分子量： C13H17N3O號(hào)：58-15-1