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產(chǎn)品名稱 | 結(jié)直腸腺癌上皮細胞：DLD-1 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0074 |
商品介紹：
名稱 結(jié)直腸腺癌上皮細胞：DLD-1 別稱DLD 1; DLD1; CoCL3 種屬人類 年齡（性別）成人 組織來源結(jié)直腸腺癌上皮細胞 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述DLD-1細胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結(jié)直腸腺癌細胞株中的一株。在ATCC和其它地方進行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細胞與HCT-15細胞相似，說明這兩者是來自同一個人的不同克隆。DLD-1細胞和HCT-15細胞的遺傳起源可通過DNA指紋鑒定證實，但染色體組型分析顯示它們?nèi)狈θ旧w標記一致改變或數(shù)目上一致改變。DLD-1細胞的CSAp陰性(CSAp-)，p53抗原表達呈陽性(p53抗原產(chǎn)生了一個C→T點突變導(dǎo)致241位的Ser→Phe)。DLD-1細胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達呈陽性，癌基因N-myc的表達未做檢測。DLD-1細胞表達腫瘤特異性核基質(zhì)蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細胞代數(shù)不明且污染了支原體，其后經(jīng)過12周多種抗生素聯(lián)合培養(yǎng)處理，處理之后每周用Hoechst染色和標準培養(yǎng)法檢測。其后連續(xù)11個月不加抗生素培養(yǎng)，DLD-1細胞所有的檢測呈陰性。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~24-48小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). 抗原表達情況Blood Type O. The cells are weakly positive for keratins and vimentin. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T mutation re 基因表達情況carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3. |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 TF 基因全長ORF克隆
大鼠 NET1 基因全長ORF克隆
大鼠 ARFGAP3 基因全長ORF克隆
大鼠 AK1 基因全長ORF克隆
大鼠 THTPA 基因全長ORF克隆
大鼠 EHD2 基因全長ORF克隆
大鼠 ALDH9A1 基因全長ORF克隆
大鼠 MRPL45 基因全長ORF克隆
大鼠 ENO1 基因全長ORF克隆
大鼠 PNPLA3 基因全長ORF克隆
結(jié)直腸腺癌上皮細胞：DLD-1 300U T7 DNA 聚合(未修飾) T7 DNA Polymerase（unmodified） -20℃保存
DTNB 肌萎Dystrobrevin β蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Transaldolase 1 轉(zhuǎn)醛醇抗體 規(guī)格: 0.2ml
UGT1A9 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移1A9 規(guī)格: 0.2ml
DPY19L2 DPY19L2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mllaminin 層粘連蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-HSF1(Ser303) 磷酸化熱休克因子1抗體 規(guī)格: 0.2mlPAR-1/Thrombin receptor 蛋白激活受體-1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-ATRIP (Ser224) 系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體 規(guī)格: 0.1ml
200次 ADP/ATP發(fā)光法細胞活力檢測試劑盒 ADP/ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit -20℃或-80℃避光保存
PPHLN1 脈周蛋白1抗體（胃抗原蛋白Ga50） 規(guī)格: 0.2ml
GlyR alpha 1/2/3 受體alpha 1/2/3型抗體 規(guī)格: 0.1ml
CD147/TCSF/Emmprin 細胞外基質(zhì)金屬蛋白誘導(dǎo)因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
1瓶 HPAC細胞株 HPAC 低溫運輸和保存
