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名稱 | U-2 OS [U2OS] (人骨肉瘤細(xì)胞) (STR鑒定正確) |
別稱 | U-2 OS; U-2OS; U-2-OS; U2-OS; U20-S; U20S; 2T |
種屬 | 人類 |
年齡（性別） | 女性，15歲 |
組織來源 | 骨；骨肉瘤 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
背景描述 | U-2 OS細(xì)胞(原名2T)是由Ponten·J和Saksela·E在1964年從一名15歲女孩的脛骨中等分化的肉瘤中分離建立的。U-2 OS細(xì)胞與WI-38細(xì)胞共培養(yǎng)或用抗猴空泡病毒SV40、呼吸道合胞病毒RSV或腺病毒的補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF法)未檢測到病毒。U-2 OS細(xì)胞表達(dá)胰島素樣生長因子I、II(IGF-I、IGF-II)受體和骨肉瘤衍生生長因子(ODGF)。 |
生物安全等級(jí) | 1 |
生長培養(yǎng)基 | McCoy's 5A＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時(shí)間 | ~25-30小時(shí) |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
受體表達(dá)情況 | insulin-like growth factor I (IGF-I);insulin-like growth factor II (IGF II) |
抗原表達(dá)情況 | Blood Type A; Rh+; HLA A2, Aw30, B12, Bw35, B40(+/-) |
基因表達(dá)情況 | osteosacoma derived growth factor (ODGF), Blood Type A; Rh+; HLA A2, Aw30, B12, Bw35, B40(+/-) |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; HTB-96 DSMZ; ACC-785 ECACC; 92022711 |
細(xì)胞傳代：
1. U-2 OS人成骨肉瘤細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
CRB2蛋白封閉多肽 | 莢膜組織胞漿菌馬皮疽變種PCR檢測試劑盒說明書 |
極小棒桿菌PCR試劑盒 | 輔meiQ10ELISA試劑盒 |
人布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)ELISA試劑盒 | 鯡精胺激meiELISA試劑盒 |
人c-sis ELISA試劑盒 | 表皮細(xì)胞生長因子受體ELISA試劑盒 |
人組織型纖溶mei原激活劑(t-PA)試劑盒ELISA | 防御suβ134ELISA試劑盒 |
人SWI/SNF相關(guān), 基質(zhì)關(guān)聯(lián),肌動(dòng)蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子,亞家族c,成員1(SMARCC1)檢測試劑盒elisa | 3型1-磷suan鞘氨醇受體ELISA試劑盒 |
細(xì)胞表面趨化因子受體6（CD196）封閉多肽 | 豬胸膜肺炎放線桿菌PCR試劑盒 |
凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白8封閉多肽 | 牡蠣包拉米蟲PCR試劑盒 |
DNA聚合meiα2封閉多肽 | 結(jié)腸彎曲桿菌PCR試劑盒 |
整合suα1封閉多肽 | 玉米內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒 |
DNA聚合meiα2封閉多肽 | 牛輪狀病毒通用PCR檢測試劑盒 |
負(fù)調(diào)控因子白細(xì)胞介su2封閉多肽 | U-2 OS人成骨肉瘤細(xì)胞耐久腸球菌PCR試劑盒 |
細(xì)胞質(zhì)分裂付出蛋白1封閉多肽 | 牡蠣包拉米蟲PCR試劑盒 |
Rho GTPmei激活蛋白24封閉多肽 | 牛羚關(guān)聯(lián)惡性卡他熱病毒PCR試劑盒 |
氧化還原meiNDOR1封閉多肽 | 牛流行熱病毒RT-PCR試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
