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產(chǎn)品介紹:
Gibson無縫克隆試劑盒
Gibson 無縫連接試劑盒是一種混合酶系統(tǒng),其可將任意方法線性化的載體和與其兩端具有重疊區(qū)域的一個或多個 PCR 片段定向重組連接。該方法不依賴于 T4 DNA 連接酶,不受載體和目的片段的酶切位點限制,可在 30 分鐘內(nèi)實現(xiàn) PCR 片段高效定向無縫克隆至載體的任意位置,從而獲得完整的雙鏈 DNA 分子。該試劑盒使用簡單,只需加入合適比例的載體和 PCR 片段在室溫孵育 15-30min 即可完成片段的連接。
原理
T5 外切酶可從雙鏈 DNA5'端切割形成 3'突出末端, 從而促進(jìn)重疊區(qū)域的具有互補序列的片段進(jìn)行退火。高保真 DNA 聚合酶可使退火的片段向 3'端延伸,從而填補片段缺口。Taq DNA 連接酶可封閉缺刻從而獲得完整的雙鏈 DNA 分子。
優(yōu)勢
1. 室溫孵育即可完成片段的連接,無需 50℃。
2. 不受載體或插入片段酶切位點限制在任意位置進(jìn)行無縫克隆
3. 不依賴于 T4 連接酶,高效連接,無堿基缺失
4. 可同時高效連接一個或多個 PCR 片段
5. 無需額外的亞克隆,菌檢陽性率高達(dá) 95%
組分
保存
-20℃可保存 2 年,-80℃可保存 5 年,避免反復(fù)凍融。
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