【原理】
乳糖+H2O —β-半乳糖苷酶→D-葡萄糖+D-半乳糖
D-半乳糖+NAD+—β-Gal-DH→D-半乳糖酸+NADPH++H+
乳糖/半乳糖檢測(cè)試劑盒
【原理】
乳糖+H2O —β-半乳糖苷酶→D-葡萄糖+D-半乳糖
D-半乳糖+NAD+—β-Gal-DH→D-半乳糖酸+NADPH++H+
【測(cè)定條件及檢測(cè)步驟】
波 長(zhǎng)：340 nm
比 色 杯：1.00㎝ (玻璃或塑料)
溫 度：20~37 ℃
測(cè) 定 時(shí)：以水或空氣校準(zhǔn)；
樣品溶液：樣品中乳糖+半乳糖的濃度為0.1-1 g/l
準(zhǔn) 確 率：在給定條件下，質(zhì)控溶液變異在5 %
| 乳糖 | 半乳糖 | ||
| 空白 | 樣品 | 空白 | 樣品 |
R1 | 200 | 200 | 200 | 200 |
R2 | 50 | 50 | -- | -- |
樣品 | -- | 100 | -- | 100 |
混合均勻并反應(yīng)20mn | ||||
R3 | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
蒸餾水 | 2000 | 1900 | 2050 | 1950 |
混合,讀取吸光度值 | A1 | A1 | A1 | A1 |
R4 | 50 | 50 | 50 | 50 |
混合均勻, 反應(yīng)30mn后讀吸光度值 | A2 | A2 | A2 | A2 |
【計(jì)算】
半乳糖測(cè)試：
ΔA半乳糖= (A2 ―A1)樣品―(A2―A1)空白
乳糖測(cè)試：
ΔA乳糖+半乳糖= (A2 ―A1)樣品―(A2―A1)空白
所以：
ΔA乳糖=ΔA乳糖+半乳糖―ΔA半乳糖
C = (V×MW×ΔA) / (ε×l×v×1000) [g/l]
