實驗操作步驟:
a.采用認可的方案處死嚙齒動物。
b.立即在無菌超凈臺內(nèi)用70%乙醇擦洗整個動物。
c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e.剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 | 貨號 |
大鼠膀胱移行上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 原代細胞 | GOY-01X0909 |
產(chǎn)品介紹:
名稱 大鼠膀胱移行上皮細胞
2.組織來源:膀胱組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介:
大鼠膀胱上皮細胞分離自膀胱組織;膀胱是一個儲尿器官,在哺乳類動物,它是由平滑肌組成的一個囊形結(jié)構(gòu),位于骨盆內(nèi),其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌,可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成,由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成,稱為逼尿肌,逼尿肌收縮,可使膀胱內(nèi)壓升高,壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌,形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口,防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層:即漿膜層(蜂窩脂肪組織)、肌肉層(逼尿肌、膀胱三角區(qū)?。┖宛つ樱O薄的一層移行上皮組織)。其主要作用有:①組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分;②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子;③受損后影響系膜細胞和上皮細胞,進而影響腎臟病變。
5.方法簡介:
()實驗室分離的大鼠膀胱移行上皮細胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:
()實驗室分離的大鼠膀胱移行上皮細胞經(jīng)Cytokeratin-AE1/AE3免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
包被條件鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
產(chǎn)品貨號CM-R058
換液頻率每2-3天換液一次
生長特性貼壁
細胞形態(tài)上皮細胞樣
傳代特性可傳1-2代
消化液0.25%
培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5%
處理方法:
收到細胞后,檢查外包裝是否完整,細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題,請即時聯(lián)系。并進行以下操作:
1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3. 預(yù)熱培養(yǎng)基(含10%胎牛血清,1%雙抗)。
4. 顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存(40×,100×,200×各一張)。
5. ①若細胞密度較小,無菌操作,去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上,進行傳代。
注意事項:
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗,以優(yōu)化實驗條件,取得最佳實驗效果。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,
避免開蓋時試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗
并*清除殘留清潔劑。
6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,如細胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟
可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。
100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.0 HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.0 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Hydroxylysine
1mL 2X PCR Mix(即用型PCR試劑盒3.0) Instant PCR Kit 3.0 -20℃保存 12.5-800 pg/mL ELISA Kit for Human Agrin
2 ug pLVX-EF1α-mCherry-N1 pLVX-EF1α-mCherry-N1 低溫運輸,
大鼠膀胱移行上皮細胞30次 低pH 緩沖液套裝 Low pH Buffer Set 常溫保存(5×低pH上樣液需要-20℃保存)
DDRGK1 DDRGK1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
PHGDH 磷酸甘油酸脫抗體 0.2mlphospho-GABBR2 (Ser892) 磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml
幽門螺旋桿菌添加劑 1ml*5
HSD17B1 羥類固醇脫17β-HSD抗體 規(guī)格: 0.1ml
麥康凱瓊脂(MAC) MaConkey Agar 250g
SERPINB1 蛋白抑制劑B1抗體 規(guī)格: 0.2ml
400U RNase抑制劑(人源) Human RNase Inhibitor -20℃保存
Goat Anti-Bovine IgG/Cy7 Cy7標記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlCR1/CD35 Ⅰ型補體受體抗體(C3b/C4b受體抗體) 規(guī)格: 0.1ml
1 管 0F大腸桿菌 0F’E.coli Strain -80℃保存
100mg RNase A干粉 RNase A Powder 4℃或-20℃保存
5g 腐胺 1,4-Diaminobutane 室溫干燥避光保存