細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PrimaCell™大鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞試劑盒 | 6次/盒 | YS-X6823 |
?
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
細(xì)胞線粒體復(fù)合物II蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
細(xì)胞亮氨酸(leucine)含量比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
血血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACE)總活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
通用型CHIP DNA分子庫構(gòu)建試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
組織胱氨酸(cystine)含量比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織樣品組織蛋白酶E(CATHEPSIN E)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
冰凍切片組織CYTOCHROME C蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
血半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
細(xì)胞組織蛋白酶B(CATHEPSIN B)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
石蠟切片組織MAPK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
異硫酸胍 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:1 公斤
組織樣品組織蛋白酶S(CATHEPSIN S)活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
PrimaCell™大鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞試劑盒1,3,5-氟氯溴分子式:英文名稱:1,3,5- fluorine chlorine bromobenzene號:454157分子量:
3-溴-4-氟硝分子式:220英文名稱:3- bromine -4-號:701-45-1分子量: C6H3BrFNO2
五氟吡分子式:169.05英文名稱:Five f號:700-16-3 分子量: C5F5N
氘代鄰二甲分子式:116.23英文名稱:Deuterium substituted xylene號:56004-61-6分子量: C8D10
二乙二二乙英文名稱:Diethylene glycol ether two分子式:162.23分子量: C8H18O3號:112-36-7
3,4-二甲氧溴分子式:217.06英文名稱:3,4- two - methoxy號:2859-78-1分子量: C8H9BrO2
3,4-二羥甲分子式:124.14英文名稱:3,4- two hydroxy toluene號:452-86-8分子量: C7H8O2
3-(*硅乙炔)吡分子式:175.31英文名稱:3- (a) pyridine號:80673-00-3分子量: C10H13NSi
6-甲氧喹啉分子式:159.18英文名稱:6- methyl group號:5263-87-6分子量: C10H9NO
利魯唑分子式:234.2英文名稱:Li Lu號:1744-22-5分子量: C8H5F3N2OS
2--6-甲吡分子式:108.14英文名稱:2- amino -6- methyl pyridine號:1824-81-3分子量: C6H8N2
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。