公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞：RBL-1 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類(lèi) | 細(xì)胞系 |
貨號(hào) | GOY-01X0420 |
商品介紹：
名稱(chēng) 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞：RBL-1 別稱(chēng)RBL 1; RBL-I; RBL; Rat Basophilic Leukemia-1 組織來(lái)源外周血 生長(zhǎng)特性懸浮細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)淋巴母細(xì)胞樣 背景描述RBL-1細(xì)胞是由H·Metzger和C·Isersky從一名白血病患者的外周血中分離并建立；RBL-1細(xì)胞表現(xiàn)出嗜堿性粒多種細(xì)胞特性，例如：RBL-1細(xì)胞表面帶有IgE受體，但在IgE介導(dǎo)的反應(yīng)中，RBL-1細(xì)胞并不釋放組織胺。 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
使用方法：
收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 IFNGR / IFNGR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 CD150 / SLAM / SLAMF1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 SIRP alpha / CD172a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 CLEC4D / CLECSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)
大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞：RBL-1 MID2/RNF60/Midline-2 環(huán)指蛋白60抗體 規(guī)格: 0.2ml
P21/CDKN1A p21蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlChondroitin Sulfate
Rabbit Anti-Goat IgM/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-NFKB1(Ser907) 磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
GluR1/AMPA 受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
EMAP2 內(nèi)皮單核細(xì)胞激活肽2抗體 規(guī)格: 0.2ml
50T 大腸埃希菌(大腸O157)stx1和stx2基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)? 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
SLC12A3/NCCT 鈉氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlAUTS2 孤獨(dú)癥易基因2蛋白抗體（自閉癥相關(guān)蛋白1） 規(guī)格: 0.2ml
LXR alpha 肝臟X受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-EGFR (Tyr1197) 磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-dog IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.3ml
1000U RecJf 核酸外切 RecJ f Exonulease -20℃保存
