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產(chǎn)品名稱 | 雞外周血淋巴細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X0708 |
商品介紹：
名稱 雞外周血淋巴細胞 2.組織來源：外周血 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 雞外周血淋巴細胞分離自外周血；所謂的外周血，即除骨髓之外的血液，就是已經(jīng)被造血器官釋放入循環(huán)系統(tǒng)參與循環(huán)的血，它區(qū)別于造血器官內(nèi)的未成熟的血細胞或未被釋放入循環(huán)的血細胞。外周血淋巴細胞（Peripheral Blood Lymphocyte）簡稱PBL，主要是血液循環(huán)中的淋巴細胞，由T細胞和B細胞組成，其中T細胞（占70%～80%）和B細胞（占20%～30%）。 5.方法簡介： ()實驗室分離的雞外周血淋巴細胞采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為1×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： ()實驗室分離的雞外周血淋巴細胞經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-C007 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細胞形態(tài)圓形 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
重組大鼠 IL21 / Interleukin 21 蛋白 (His 標簽)
重組人 IL7 / interleukin 7 蛋白
重組小鼠 IL13 / ALRH 蛋白
重組狗 IL21 / Interleukin 21 蛋白
重組小鼠 IL21 / Interleukin 21 蛋白
重組狗 IL4 / Interleukin-4 蛋白
重組小鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白
重組大鼠 IL3 / interleukin 3 蛋白 (His 標簽)
重組狗 IL5 蛋白 (His 標
雞外周血淋巴細胞NAC液體培養(yǎng)基 NAC Solid Medium 250g
ANKRD17 錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 規(guī)格: 0.2ml
PDZD7 PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK7蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCIDE A DNA斷裂因子相似蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml
TMEM49 跨膜蛋白49抗體 規(guī)格: 0.2ml
RNF34 環(huán)指蛋白34抗體 規(guī)格: 0.2ml
MCP-3/CCL7 單核細胞趨化蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea pig IgG/APC APC標記的兔抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr228) 磷酸化核糖體S6蛋白激β2抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Wee1(Ser642) 磷酸化WEE1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
TMEM161A 跨膜蛋白161A抗體 規(guī)格: 0.2mlG protein beta 4/GNB4 G蛋白β4抗體/核苷酸結(jié)合蛋白β亞基4 規(guī)格: 0.2ml
BRCA1/BAP1 易基因1抗體 規(guī)格: 0.1ml
2 ug pYest2/ct pYest2/ct 低溫運輸，-20℃保存
