細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠心肌成纖維細胞提取物說明 | T25m2 | CS-964155 |
大鼠心肌成纖維細胞提取物【Rat Heart: Normal Heart Fibroblast Derivatives】大鼠心肌成纖維細胞提取物是從大鼠心肌成纖維細胞提取的,大鼠心肌成纖維細胞從正常大鼠心肌組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞處理方法:
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度,細胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術(shù)指導(dǎo),請及時電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當(dāng)細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。
1139-83-9 Urolithin B 100mg Leishmania major碩大利什曼原蟲LAMP試劑盒
1139-83-9 Urolithin B 10mg Leishmania tropica熱帶利什曼原蟲LAMP試劑盒
1139-83-9 Urolithin B 50mg Leishmania major碩大利什曼原蟲LAMP試劑盒
113-98-4 Penicillin G potassium (Benzylpenicillin potassium) 250mg Leishmania infantum嬰兒利什曼蟲LAMP試劑盒
113-98-4 Penicillin G potassium (Benzylpenicillin potassium) 5g Leishmania infantum嬰兒利什曼蟲LAMP試劑盒
PLAUR Others Mouse 小鼠 uPAR / PLAUR / CD87 細胞裂解液 (陽性對照) 雙乙酸鈉 diacetate質(zhì)量規(guī)格:>99%
管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)L-甘-谷二肽,甘氨酰-L-谷氨酰胺一水合物Glycyl-L-glutamine monohydrate質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
BTC Others Cynomolgus 食蟹猴 BTC / Betacellulin 細胞裂解液 (陽性對照) 6-羥基多沙唑嗪6-Hydroxy Doxazosin質(zhì)量規(guī)格:美國進口
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albino7-羥基多沙唑嗪7-Hydroxy Doxazosin質(zhì)量規(guī)格:美國進口
16HBE細胞,支氣管上皮細胞 化學(xué)轉(zhuǎn)化小鼠鼻咽上皮細胞,TMNE細胞 CL-0178OVCAR-3(卵巢癌細胞)5×106cells/瓶×2恩替卡韋 Labeled d2, 15N, 13CEntecavir Labeled d2, 15N, 13C質(zhì)量規(guī)格:美國進口
大鼠心肌成纖維細胞提取物說明Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達株;293sars181AAmberlite XAD-4 非離子型大孔樹脂(粒徑0.49 - 0.69 mm)質(zhì)量規(guī)格:粒徑0.49 - 0.69 mmAmberlite XAD4
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照) 茴香1(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于萜1分析,≥99.5% (GC))質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于萜1分析,≥99.5% (GC)trans-Anethole
CL-0224SW579(甲狀腺鱗癌細胞 )5×106cells/瓶×2山崳酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品Behenic acid
PARP1 Others Human PARP-1 / PARP 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 乙基叔丁基(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品tert-Butyl ethyl ether
成纖維細胞cDNAHLF cDNAADP.Na2; 5'-二1酸腺苷二鈉/腺苷-5'-二1酸二鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:>95.0%,BRAdenosine-5'-diphosphate di salt(ADPna)
我公司提供原代細胞、細胞系、細胞株和菌種,細胞庫管理規(guī)范,提供的細胞株背景清楚,提供參考文獻和*培養(yǎng)條件。純度可達 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。