細(xì)胞核蛋白提取試劑盒50T免費(fèi)代測產(chǎn)品簡介:
核蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種原代或傳代細(xì)胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。
細(xì)胞核蛋白提取試劑盒50T免費(fèi)代測實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
細(xì)胞核蛋白提取試劑盒50T免費(fèi)代測注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
檀香Santalum album Santalol 檀香醇 11031-45-1 C15H24O ≥98%
白屈菜紅減ChqlqrythrinqHPLC≥98%;20mg/支
茶黃素-3-沒食子酸酯 Theaflavin-3-Gallate(TF-3-G) 30462-34-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
中藥對照藥材豬殃殃121513-200501TLC法鑒別
BACOSIDE A3 苦艾素A3純度:>95%
16150-44-0 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
狗牙花 Ervatamia kwangsiensis Tsiang 狗牙花減 D 119188-37-3 C20H30O3 ≥98% *(N0700000
HDI Derivative標(biāo) m7i Derivative標(biāo) 2,6-TDI Derivat
Polyvinyl Acetate Dispersion聚乙酸酯分散體標(biāo)準(zhǔn)品9003-20-7 1g聚乙酸酯分散體標(biāo)準(zhǔn)品
重樓皂苷VII 76296-75-8 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
附子靈 Fuziline 分 子 量:454.0000 分子式:C24H39NO7 附子靈 --(Fuziline )的詳細(xì)信息 【性狀】白色晶體,熔點(diǎn)208~209 ℃,可溶于、餅酮、DMSO等溶劑。 【主要用途】用于含量測定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
余甘子Phyllanthus emblica Momor-cerebroside I Momor-腦苷脂I 606125-07-9 C48H93NO10 DL-別蘇安酸01595-100
含量測定脫水*內(nèi)酯琥珀酸半酯111598-200807-20℃,避光20mg
Polyoxyl 10 Stearyl 聚氧硬脂酸酯標(biāo)準(zhǔn)品9005-00-9 1g
半枝蓮Scularia barbata 4'-xy7noxywogonin 4'-羥基漢黃芩素 57096-02-3 C16H12O6 ≥98.5%
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