購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細胞價格并預約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | R5421 感受態(tài)細胞 100ul*5 |
| 包裝 | 100ul*50 |
| 分類 | 酵母感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
shēng huà shì jì 100bp DNA Ladder I 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 100bp DNA Ladder Ⅱ 容量： 100克
shēng huà shì jì 1000ul吸頭 容量： 保存：-20℃ 1KU
shēng huà shì jì 1000ul無菌盒裝吸頭 容量： 保存：-20℃ 1毫克
shēng huà shì jì 1000ul盒裝吸頭 容量： 1KU
shēng huà shì jì 1000ul盒裝無菌帶濾芯吸頭 容量： 保存：-20℃ 500U
shēng huà shì jì 1000ul袋裝無菌濾芯吸頭 容量： 500ug
shēng huà shì jì 1.8ml外旋凍存管 容量： 2～8℃ 250毫克
shēng huà shì jì 1.8ml內旋凍存管 容量： 500U
shēng huà shì jì 1.8cm細胞刀 容量： 保存：-20℃ 1克
R5421 感受態(tài)細胞 100ul*5shēng huà shì jì 1.5ml離心管盒 容量： 100KU
shēng huà shì jì 1.5ml離心管 容量： 保存：-20℃ 150u
shēng huà shì jì 1.5ml凍存管 容量： 1.2KU
shēng huà shì jì 1.4-雙（5-苯基-2-惡唑）苯 容量： 2.5升
shēng huà shì jì 1.2ml凍存管 容量： 2～8℃ 500u
shēng huà shì jì 1,8-二羥基蒽醌 容量： 100克
shēng huà shì jì 1，7-庚二胺 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 1，6-己二醇 容量： 100克
shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸四水物 容量： 500克
shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸鈉 容量： 2～8℃ 10克
shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸 容量： 100克
shēng huà shì jì 1,5-二羥基萘 容量： 100克
shēng huà shì jì 1,4-雙(5-苯基-2-噁唑基)苯 容量： 2.5升
shēng huà shì jì 1,4-二氧六環(huán) 容量： RT 10克
shēng huà shì jì 1，4-二溴丁烷 容量： 2～8℃ 100毫克
shēng huà shì jì 1,4-二羥基萘 容量： RT 10克
shēng huà shì jì 1,4-二羥基蒽
A-498(人腎癌細胞) 5×106cells/瓶×2
A875(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
AM(人腺樣囊性癌細胞（高轉移）) 5×106cells/瓶×2
BC-009(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2
BC-019(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2
BC-020(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2
BC-021(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2
BC-022(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2
BE(2)-M17(人神經(jīng)母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
BGC-803(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2
C918(人眼脈絡黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
CAL-27(人舌鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2
LS 180(人結腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CNE-2Z(人鼻咽癌細胞) 5×106cells/瓶×2
COLO 201(人結直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CW-2(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CRT(人神經(jīng)膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
D283 Med(人腦髓母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
EA.hy926(人臍靜脈細胞融合細胞) 5×106cells/瓶×2
ECV-304(人臍靜脈內皮細胞) 5×106cells/瓶×2
EJ(人膀胱癌細胞) 5×106cells/瓶×2
H-97(人高轉移肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HCC94(人子宮鱗癌細胞（高分化）) 5×106cells/瓶×2
HCCLM3(人高轉移肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HEL(人紅白細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2
HELF(人胚肺成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2
HO-8910PM(人高轉移卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Ishikawa(人子宮內膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2
L-O2(人正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2
M1(小鼠白血病細胞) 5×106cells/瓶×2
M14(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
MA-891(小鼠細胞癌高轉移細胞) 5×106cells/瓶×2
MDA-MB-435(人細胞癌高轉移細胞) 5×106cells/瓶×2
MDA-MB-468(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2
25克
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
| R5421 感受態(tài)細胞 100ul*5 |
