小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(G422)
細(xì)胞介紹
1964年建株；甲基膽蒽植入Km小鼠腦內(nèi)誘發(fā)星形細(xì)胞瘤，傳至第120代后轉(zhuǎn)為
膠質(zhì)細(xì)胞瘤；瘤細(xì)胞懸液同系小鼠皮下、肌肉、腦內(nèi)移植，成功率皆。肌肉及腦內(nèi)移植可形成較規(guī)律的移植性瘤株，存活時(shí)間腦內(nèi)型15.9±4.8天；肌肉型20.3±6.6天。
細(xì)胞特性
1)來(lái)源：星形細(xì)胞瘤
2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)
3)含量：>lxl06個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
細(xì)胞接受后的處理：
1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2.請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37°C培養(yǎng)約 2-3h0
3.棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4.如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5.接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉谩?br />小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(G422)細(xì)胞用途：僅供科研使用。
本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號(hào)11995-065)，90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37°C，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
2)細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入lmL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。
第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入lmL培養(yǎng)液后吹勻。
移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管 中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(G422)注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
