產(chǎn)品名稱：HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞)保存運(yùn)輸
英文名稱：HCCLM3(highly metastatic human hepatocellular carcinoma cell)
規(guī)格：5×105cells/瓶
產(chǎn)品貨號：FS-X0834
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞)保存運(yùn)輸的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
收到后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2）請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉?/a>。
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞)保存運(yùn)輸培養(yǎng)操作流程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號21127-022），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1，細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
KIT 人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ 96T
TGF- Beta1(Human Transforming Growth factor Beta1) ELISA kit 人轉(zhuǎn)化生長因子β1 96T
HL ELISA Kit 大鼠肝脂酶 96T
Mouse trypsin ELISA Kit 小鼠* 96T
N-AChR ELISA Kit 大鼠煙堿型乙酰*受體 48T96T
TGF- Alpha(Human transforming growth factor Alpha) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)化生長因子α 96T
ODF(Mouse osteoclast differeiation factor) ELISA Kit 小鼠破骨細(xì)胞分化因子 96T
M-AChR ELISA Kit 大鼠毒蕈堿型乙酰*受體 96T
TLR-9/CD289(Mouse Toll-like receptor 9) ELISA kit 小鼠Toll樣受體9 96T
SDF-1 Beta/CXCL12(Human Stromal cell derived factor 1 Beta) ELISA kit 人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β 96T
SCFR(Human Stem Cell Factor Receptor) ELISA kit 人干細(xì)胞因子受體 96T
Lep IgG(Mouse Leptospira IgG) ELISA Kit 小鼠鉤端螺旋體IgG 96T
APC ELISA Kit 大鼠活化蛋白C 96T
GAL ELISA Kit 大鼠甘丙肽/甘丙素 96T
GHRP-Ghrelin(Mouse growth hormone releasing peptide-Ghrelin) ELISA Kit 小鼠生長激素釋放肽ghrelin 96T
SCF/MGF(Human Stem cell factor/mast cell growth factor) ELISA kit 人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子 96T
sCD40L(Human Soluble Cluster of differeiation 40 ligand) ELISA Kit 人可溶性CD40配體 96T
vaspin(Mouse Visceral adipose-specific serine protease inhibitor) ELISA Kit 小鼠內(nèi)臟脂肪特異性*蛋白酶抑制劑 96T
a-Glu ELISA Kit 大鼠α葡萄糖苷酶 96T
ODF ELISA Kit 大鼠破骨細(xì)胞分化因子 96T
BrdU(Mouse Bromodeoxyuridine) ELISA Kit 小鼠溴脫氧核苷* 96T
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞)保存運(yùn)輸sCD30L(Human Soluble Cluster of differeiation 30 ligand) ELISA Kit 人可溶性CD30配體 96T
RAES/CCL5(Human regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted) ELISA kit 人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子 96T
TGF Beta2(Mouse transforming growth factor Beta2) ELISA Kit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2 96T
TLR-9/CD289 ELISA kit 大鼠Toll樣受體9 96T
Lep IgG ISA Kit 大鼠鉤端螺旋體IgG 96T
Alpha1-MG(Mouse Alpha1-microglobulin) ELISA Kit 小鼠α1微球蛋白 96T
P-Selectin(Human P-Selectin/CD62P/GMP140) ELISA kit 人P選擇素 96T
