?儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,產(chǎn)品僅用于科研請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
豬皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí),由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
產(chǎn)品名稱 | 豬皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Porcine herpesvirus |
貨號(hào) | CP914734 |
相對定量簡介:
分析方法: ①雙標(biāo)曲法 ②2 - △Ct ③2 - △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡介
公式:
優(yōu)點(diǎn):分析簡單,實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡單
缺點(diǎn):對每一個(gè)基因,每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線;必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線;這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用:基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對定量方法之一
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為:待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
樣品要求及注意事項(xiàng):
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動(dòng)植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細(xì)胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細(xì)胞:5×106動(dòng)植物,酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進(jìn)行評估。
4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。
茶堿標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :58-55-9
草艾司西酞普蘭雜質(zhì)A對照品標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :128173-53-5
蒼白松果菊標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :97281-15-7
殘留溶劑第2類混合物C標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :
殘留溶劑第2類混合物B標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :
殘留溶劑第2類混合物A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :
殘留溶劑第1類標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :
布美他尼相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :28328-53-2
布洛芬相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :38861-78-8
布林佐胺相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :404034-55-5
布林佐胺相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :154127-19-2
布比卡因相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :15883-20-2
波生坦標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :
丙戊相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :62391-99-5
丙戊相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱: :99-67-2
特定成熟微型RNA(miRNA)反義抑制劑合成 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:2 U
特定成熟微型RNA(miRNA)2位修飾抑制劑合成 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:2 U
微型RNA(miRNA)目標(biāo)基因探測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:5次
微型RNA(miRNA)表達(dá)載體連接試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
微型分子直接細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
微型RNA(miRNA)表達(dá)載體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
DICER酶基因敲除試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:5次
微型RNA(miRNA)文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:1個(gè)樣本
特定微型RNA目標(biāo)基因探測技術(shù)服務(wù) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:1個(gè)分子
微型RNA文庫數(shù)據(jù)庫(在建) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:會(huì)員制
豬皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒Pediococcus acidilactici Lindner資源名稱乳酸片球菌提供形式:凍干管,斜面培養(yǎng)物人Casp-12 ELISA試劑盒
Clostridium tyrobutyricum資源名稱酪丁酸梭菌提供形式:凍干管,斜面培養(yǎng)物人Casp-12 ELISA試劑盒
Bifidobacterium│longum資源名稱長雙歧桿菌分離基物:健康嬰兒糞便人PKA ELISA試劑盒
Staphylococcus albus Rosenbach資源名稱白色葡萄球菌提供形式:凍干粉人ADAM10 ELISA試劑盒
Listeriawelshimeri資源名稱威爾氏李斯特菌安全等級(jí):1人MMP11 ELISA試劑盒
Neurospora crassa資源名稱粗糙鏈孢霉提供形式:凍干粉人TS ELISA試劑盒
Candida utilis(Henneberg)LodderetKreger-vanRij資源名稱產(chǎn)朊假絲酵母提供形式:凍干粉人TP ELISA試劑盒