實(shí)驗(yàn)室分光光度計(jì)利用紫外光、可見(jiàn)光、紅外光和激光等測(cè)定物質(zhì)的吸收光譜,利用此吸收光譜對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析和物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析的方法,稱(chēng)為分光光度法或分光光度技術(shù),使用的儀器稱(chēng)為分光光度計(jì),這種分光光度計(jì)靈敏度高,測(cè)定速度快,應(yīng)用范圍廣,其中的紫外/可見(jiàn)分光光度技術(shù)更是生物化學(xué)研究工作中*的基本手段之一。
實(shí)驗(yàn)室分光光度計(jì)基本結(jié)構(gòu):
(1)電光系統(tǒng) :電光系統(tǒng)主要由氘燈、鎢燈和相應(yīng)的電源組成。電光系統(tǒng)對(duì)整機(jī)的穩(wěn)定性有很大的影響,是儀器不穩(wěn)定的主要原因之一。
(2)光學(xué)系統(tǒng):光學(xué)系統(tǒng)包括外光路系統(tǒng)(轉(zhuǎn)向平面鏡、聚光鏡)、單色器兩個(gè)主要部分;其中,外光路和單色器各有很多類(lèi)型。單色器是紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)雜散光的主要來(lái)源,是整機(jī)使用時(shí),主要分析誤差的來(lái)源之一。
(3)光電系統(tǒng):夕光電系統(tǒng)是將光信號(hào)變?yōu)殡娦盘?hào)的關(guān)鍵部件,直接影響儀器的靈敏度和適用范圍;一般有光電管、光電倍增管、硅光電池、二極管陣列等。
(4)電子系統(tǒng) :電子系統(tǒng)主要由放大器、A/D變換器等組成;其中的放大器,也是影響整機(jī)靈敏度、穩(wěn)定性的主要部件。它又是儀器噪聲的主要來(lái)源部件,直接影響紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的分析誤差。 、-
(5)數(shù)據(jù)處理、輸出打印系統(tǒng) :數(shù)據(jù)處理、輸出打印系統(tǒng)是決定整機(jī)的自動(dòng)化程度的關(guān)鍵部件;特別是軟件部分,直接影響紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的質(zhì)量。
實(shí)驗(yàn)室分光光度計(jì)操作規(guī)程
1.選定波長(zhǎng):根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器,使指針指示所需要的單色光波長(zhǎng)。
2.預(yù)熱儀器:接通電源開(kāi)關(guān),開(kāi)啟樣品室暗箱蓋,模式處于T狀態(tài)下預(yù)熱20分鐘;(為了防止光電管疲勞,不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時(shí)和在不測(cè)定時(shí)應(yīng)將光路斷開(kāi))
3.將裝有參比溶液和被測(cè)樣品的比色皿依次置于樣品室中(參比置于*個(gè)格),
4.調(diào)節(jié)“T=0%”點(diǎn):開(kāi)啟樣品室暗箱蓋,T應(yīng)為0%,否則調(diào)“0%T”按鍵使T顯示為0000;
5.調(diào)節(jié)T=100%:合上樣品室暗箱蓋,并使參比溶液置于光路,此時(shí)T應(yīng)為,否則調(diào)節(jié)“100%T”按鍵,使指針指在T=100%。(注意:不測(cè)定時(shí),應(yīng)切斷光路(開(kāi)啟暗箱蓋),防止光照長(zhǎng)時(shí)間照射檢測(cè)器)
6. 樣品的測(cè)定:把模式設(shè)置為A,將樣品液依次處于光路中,分別記下被測(cè)樣品的吸光度。
7.測(cè)量完畢,及時(shí)取出比色皿,洗干凈后倒置于濾紙上晾干,關(guān)掉電源。
8.填寫(xiě)儀器使用記錄表
實(shí)驗(yàn)室分光光度計(jì)詳細(xì)參數(shù):
儀器型號(hào):X2
波長(zhǎng)范圍:320-1020nm
光譜帶寬:5nm 波長(zhǎng)準(zhǔn)確度:±2nm
波長(zhǎng)重復(fù)性:1nm
光度準(zhǔn)確度:±0.5%T
光度重復(fù)性:0.2%T
雜散光:0.4T(360nm/420處)
zui小分辨率1nm
吸光度范圍:-0.3-3.0A,0-200%T