細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
PrimaCell™人心肌成纖維細(xì)胞試劑盒規(guī)格 | 6次/盒 | YS-X6637 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
載玻片細(xì)胞CYP2B1蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
糖蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品——辣過(guò)氧化酶 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:1毫克
細(xì)胞鈣調(diào)神經(jīng)酶(CALCINEURIN;PP2B)活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
純化微粒體磷脂酶D(Phospholipase D)總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB直接檢測(cè)試劑盒(含HRP一抗) 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
膜電位依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
同位素真菌/酵母細(xì)胞蛋白核酸結(jié)合凝膠遷移電泳分析試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
動(dòng)物糖蛋白氨基苯硼酸(APA)樹脂法純化試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:5次
組織樣品細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
組織游離脂肪酸酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:10次
蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印印跡膜萘酚藍(lán)(NBB)染色試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:20次
動(dòng)物硬組織活性線粒體分離試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:50次
PrimaCell™人心肌成纖維細(xì)胞試劑盒規(guī)格寶藿苷Ⅰ 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
王不留行黃酮苷 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
偽原薯蕷皂苷(暫行) 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
絡(luò)石苷 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
α-醇(暫行) 鑒別 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 2-8℃,避光 規(guī)格: 0.1ml
竹節(jié)參皂苷ⅠVa(暫行) 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
三百草酮 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
櫟癭酸 鑒別 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
大戟二烯醇 含量測(cè)定 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 4℃,避光 規(guī)格: 20mg
長(zhǎng)梗冬青苷 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
8-0-酰山梔苷酯 供含量測(cè)定用 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 常溫,避光 規(guī)格: 20mg
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。