公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
細(xì)胞傳代:
1. 小鼠成肌細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備:200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號(hào)筆,培養(yǎng)皿,離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液,消化 1 分鐘(37℃,5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁,觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸,使細(xì)胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中,1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中,混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中,使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染:
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中,震蕩 10 秒鐘,溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在-20 攝氏度保存,使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質(zhì)體體積:DNA 質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA,震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,再次震蕩。
9號(hào)染色體開放閱讀框153封閉多肽 | 卡氏肺孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒 |
犬呼吸道病毒RT-PCR試劑盒 | 核有絲分裂器蛋白1ELISA試劑盒 |
人肝臟甘油三脂脂肪mei(HTGL)試劑盒ELISA | 汗suanmeiαLELISA試劑盒 |
人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒 | Girdin蛋白ELISA試劑盒 |
小鼠白介su4(IL-4)試劑盒ELISA | 含V-Set域T細(xì)胞激活抑制因子1ELISA試劑盒 |
人L選擇su(L-Selectin/CD62L)試劑盒 ELISA | 型受體α5ELISA試劑盒 |
氧固醇結(jié)合蛋白樣2封閉多肽 | 豬傳染性胃腸炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
INTS4蛋白封閉多肽 | 狂犬病病毒通用RT-PCR試劑盒 |
FAM13B1蛋白封閉多肽 | 猿皰疹病毒PCR試劑盒 |
有絲分裂激meiA封閉多肽 | 豬胸膜肺炎放線桿菌PCR試劑盒 |
FAM190A蛋白封閉多肽 | 人皰疹病毒(HHV)核suan檢測(cè)試劑盒 |
粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2封閉多肽 | 小鼠成肌細(xì)胞蠟狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
泛su蛋白連接mei2N封閉多肽 | 枯草芽孢桿菌PCR試劑盒 |
磷suan化微管相關(guān)蛋白4封閉多肽 | 人SARS RT-PCR試劑盒 |
候選腫瘤抑制基因MARVELD1封閉多肽 | 人核糖核suanmeiP基因PCR測(cè)定試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作:
①進(jìn)無(wú)菌室前要洗手,按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì),吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng),以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,危害培養(yǎng)細(xì)胞,同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶,開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位,避免直立,以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口,培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話,咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí),應(yīng)專管專用,一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去,以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面,用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面;防止細(xì)胞交叉污染:所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備,一旦懷疑發(fā)生交叉污染,可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定,如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變,可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。