標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:
1.直接配制法 對(duì)于純凈的物質(zhì)(稱(chēng)做基準(zhǔn)物質(zhì))可準(zhǔn)確進(jìn)行稱(chēng)量,用蒸餾水溶解后,轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標(biāo)線,溶液的準(zhǔn)確濃度可以直接計(jì)算出來(lái)。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對(duì)濃度有較大影響,為此,對(duì)用來(lái)直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液用的基準(zhǔn)物質(zhì)必須具備以下條件:
(1)物質(zhì)的純度要高,含量不得低于99.9%,雜質(zhì)的含量應(yīng)當(dāng)少到可以忽略的程度。
(2)物質(zhì)的分子組成應(yīng)與其化學(xué)式*符合,包括結(jié)水合物中的結(jié)品水含量也必須與其化學(xué)式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。
(3)性質(zhì)穩(wěn)定,貯蔵時(shí)應(yīng)不發(fā)生變化,不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分,不易風(fēng)化潮解和被空氣氧化,烘干時(shí)不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準(zhǔn)物質(zhì)以減小稱(chēng)量誤差。
2.間接配制法 凡不符合基準(zhǔn)物質(zhì)條件的物質(zhì),可先配制成近似所需濃度的溶液,再用基準(zhǔn)物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定,求其準(zhǔn)確濃度,這種通過(guò)滴定來(lái)確定準(zhǔn)確濃度的操作叫做“標(biāo)定”。間接法配制近似濃度溶液時(shí)不需用分析天平稱(chēng)量和容量瓶配制,可用臺(tái)秤、量筒等器皿。將稱(chēng)好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中,先加少量蒸餾水將其溶解,繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準(zhǔn)物的條件,故間接法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì);濃鹽酸因易揮發(fā)而無(wú)法準(zhǔn)確稱(chēng)量;不易得到分析純級(jí)的試劑等,這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液須用間接法來(lái)配制,經(jīng)標(biāo)定后再做標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。
公司產(chǎn)品具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn),咨詢(xún)并訂購(gòu)!
產(chǎn)品名稱(chēng):斜面培養(yǎng)基說(shuō)明書(shū)
貨號(hào):BJ-01R3334
規(guī)格:500ml
分類(lèi):培養(yǎng)基
儲(chǔ)存條件:4℃,6個(gè)月
用途:用于大腸桿菌或枯草芽孢桿菌的培養(yǎng),并用于制備堿性磷酸酶。
注意事項(xiàng):主要由0.5%牛肉膏、1%蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉等組成,一般pH值為7.2-7.4,經(jīng)高壓滅菌處理,呈膠凍狀。
注意事項(xiàng):
1、盡注意無(wú)菌操作,避免污染。
2、避免反復(fù)凍融。
3、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定:
1.用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定法
(1)多次稱(chēng)量法 用減重法精密稱(chēng)取幾份(如2~3份)基準(zhǔn)物質(zhì),分別倒入編號(hào)的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi),各加少量蒸餾水溶解,再加指示劑后分別用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn),各自記錄所消耗待標(biāo)定溶液的體積,結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度,最后取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。
(2)移液管法 精密稱(chēng)取一份基準(zhǔn)物質(zhì),在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解,順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中,多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中,最后配成一定體積的溶液,混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中,加指示劑后用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn),每次做好記錄,根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積,結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量,分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。
2.比較法標(biāo)定 如果待標(biāo)定溶液能與某標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行反應(yīng),可吸量一定體積的某標(biāo)準(zhǔn)溶液,用待標(biāo)定溶液滴定,或吸量一定體積的待標(biāo)定溶液,用某標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,按N1V1=N2V2式可以計(jì)算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。這種用標(biāo)準(zhǔn)落液來(lái)測(cè)定待標(biāo)定溶液準(zhǔn)確濃度的過(guò)程稱(chēng)為“比較法”標(biāo)定。如果某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度由于某些原因不夠準(zhǔn)確時(shí),就會(huì)直接影響待標(biāo)定溶液濃度的準(zhǔn)確性,顯然比較法不如用基準(zhǔn)物質(zhì)直接標(biāo)定的方法精確,但比較法簡(jiǎn)便易行。
標(biāo)定完畢,蓋緊標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶塞,瓶簽上注明標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱(chēng)、準(zhǔn)確濃度和日期等。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
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斜面培養(yǎng)基說(shuō)明書(shū)線粒體提取試劑盒50T|100T
線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10)Mitochondrial Membrane Potential Kit(JC-10 Assay)100T
支原體檢測(cè)試劑盒Mycoplasma Detection Kit100T-200T
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Hoechst 33342 染色液(即用型)Hoechst 33342 Stain solution(ready-to-use)10ml|50mL
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