鞏膜成纖維細胞公司正在出售的產(chǎn)品：琥珀單酯 規(guī)格： 100mg
木犀草-7-O-新橙皮糖 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
規(guī)格： 20mg
39011-91-1羥基芍藥;oxypaeoniflori 規(guī)格： 20mg
130-86-9原 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg
規(guī)格： 1g
6155-35-7鼠李糖;L-Rhamse moh 規(guī)格： 100mg
59-30-3葉 規(guī)格： 20m
公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 鞏膜成纖維細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1380 |
商品介紹：
名稱 鞏膜成纖維細胞 2.組織來源：鞏膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人鞏膜成纖維細胞分離自鞏膜組織，鞏膜是眼球壁的主要組成之一。是眼球纖維膜的后5/6部分。前方聯(lián)接角膜，后方與視神經(jīng)的鞘膜延續(xù)。鞏膜在視神經(jīng)穿出部附近最厚，愈前愈薄，在肌腱附著處又復增厚（鞏膜厚度：后極部1mm，赤道部0.4～0.5mm，直肌附著處0.3mm）。其與角膜交界處，外面有環(huán)形的角膜溝，深部有鞏膜靜脈竇。小兒的鞏膜為淺藍色，成年為白色，老年因脂肪沉著而帶黃色。鞏膜結構堅韌，有支持和保護眼內組織的作用。成纖維細胞是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。 5.方法簡介： ()實驗室分離的人鞏膜成纖維細胞采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的人鞏膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H242 換液頻率每2-3天換液一次； 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳3-5代左右 消化液0.25% |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2 ug pVL1393 pVL1393 低溫運輸，-20℃保存
含225mlEC肉湯均質袋 10個/包
1000 U 限制性內切PvuII Restriction Endonuclease -20℃保存
250mL RNase-Free SSC（無RNase的SSC）,20X RNase-Free SSC,20X 常溫保存
1 管 BL21(AI)大腸桿菌 BL21(AI) E.coli Strain -80℃保存
2 ug pQETirs-system pQETirs-system 低溫運輸
鞏膜成纖維細胞多價蛋白胨 英文名稱：Polypeptone 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠5核苷酸(5-NT)免疫試劑盒進口、組裝
特殊蛋白胨 英文名稱：Peptone Special 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒進口、分裝
去氧膽酸鈉 英文名稱：Desoxycholate Salt 產(chǎn)品規(guī)格：100g 小鼠4-羥基壬烯酸(HNE)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
酵母浸粉 英文名稱：Yeast Extract Powder 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)免疫試劑盒*直銷
豬胃消化粉 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)免疫試劑盒進口、組裝
豬膽粉 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)免疫試劑盒進口、分裝
酵母浸粉（進口） 英文名稱：Yeast Extract Powder 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
麥芽浸粉 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：200g 小鼠3-硝基酪(3-NT)免疫試劑盒*直銷
干酪素 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠3-α羥基類固醇脫氫(Akr1c9)免疫試劑盒進口、組裝
水解乳蛋白 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小
