使用方法：
收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠成纖維細(xì)胞：PA317 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細(xì)胞系 |
貨號 | GOY-01X0182 |
商品介紹：
名稱 小鼠成纖維細(xì)胞：PA317 別稱pA317 年齡（性別）胚胎 組織來源胚胎 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 背景描述PA317細(xì)胞源自TK-NIH/3T3細(xì)胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細(xì)胞，結(jié)果生成可以感染許多哺乳動物細(xì)胞的雙嗜性載體顆粒。PA317細(xì)胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟?，可能因?yàn)橛糜跇?gòu)建PA317細(xì)胞而轉(zhuǎn)入的DNA丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細(xì)胞百分比隨傳代而減少。在含0.03mM次、0.001mM氨甲喋呤和0.02mM胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細(xì)胞。選擇后，PA317細(xì)胞應(yīng)在HT培養(yǎng)基(0.03mM次、0.02mM胸苷)中培養(yǎng)4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤，此后PA317細(xì)胞不需選擇可以穩(wěn)定至少1個(gè)月。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠 ADIPOQ 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 CTLA4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 CTLA4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 B7-1 / CD80 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 B7-1 / CD80 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 CD5 基因
小鼠成纖維細(xì)胞：PA317 Mouse Anti-Rabbit IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 2ml
CLDND1 膜蛋白CLDND1抗體 規(guī)格: 0.1mlCYP11B2 醛固酮合成CYP11B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-PDGFRA(Tyr1018) 磷酸化小板源性生因子受體-α抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-PKC delta (Ser645) 磷酸化蛋白激C亞性D型抗體 規(guī)格: 0.1ml
Torc2/Crtc2 CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體 規(guī)格: 0.1ml
LZTS1 假定瘤抑制拉鏈蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Leptin receptor/Ob-R 瘦素受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
制備培養(yǎng)基
50次 血液DNAout Blood DNAOUT 常溫
50T 山羊痘病毒PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50次 一站式磁珠法植物mRNAout
1瓶 FaDu細(xì)胞株 FaDu 低溫運(yùn)輸和保存
50T 麩質(zhì)Gluten基因PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
