樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。
2). 過(guò)濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測(cè)試盒說(shuō)明書過(guò)過(guò)濾)。
4 ). 果糖含量測(cè)試盒說(shuō)明書過(guò)加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10). 含脂肪的樣品用熱水提取。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
紫外分光光度法 | 50管/48樣 | BJ-01S9569 |
商品介紹:
測(cè)定意義:
TPX屬于過(guò)氧化物酶家族,在體內(nèi)主要通過(guò)還原過(guò)氧化氫和一些氫過(guò)氧化物來(lái)實(shí)現(xiàn)抗氧化作用,功能與GPX類似,也是氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內(nèi),酵母、植物、動(dòng)物、原生動(dòng)物、寄生蟲甚至細(xì)菌和古細(xì)菌體內(nèi)都含有該酶,在進(jìn)化上高度保守。TPX與細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞凋亡及腫瘤發(fā)生調(diào)控密切相關(guān)。TPX的主要功能包括細(xì)胞脫毒、抗氧化和調(diào)節(jié)由過(guò)氧化氫介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和免疫反應(yīng)。
測(cè)定原理:
TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇(DTT),H2O2的吸收波長(zhǎng)為240nm,通過(guò)測(cè)定240nm波長(zhǎng)處吸光度的下降速率,即可計(jì)算出TPX活性。
需自備的儀器和用品:
紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、3ml石英比色皿、雙蒸水
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
人 TLR9 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 CLCA2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 GGT6 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 DCTN1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 NPBWR2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 MAB21L2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 AGMAT 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 GSR 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 ATG4D 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 EIF3M 基因全長(zhǎng)ORF克隆
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