備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產品名稱 | 大鼠胃蛋白酶(Pepsin)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Rat pepsin (Pepsin) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9764 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
HPAC細胞,人胰腺腺泡上皮癌 人舌癌細胞,T6細胞 雜交瘤(B類);C3110D2E11梣酮(標準品)Fraxinellone質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
JEG-3(人絨毛膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2茶黃素(標準品)Theaflavin質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
Promocell C-25010 Hepatocyte Growth Medium, 肝細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml茶黃素-3'-沒食子酸酯Theaflavin-3'-gallate質量規(guī)格:HPLC≥95%,標準品
人間充質干細胞(骨髓)cDNAHMSC-bm cDNA茶黃素-3-沒食子酸酯Theaflavin-3-gallate質量規(guī)格:HPLC≥95%,標準品
FAP Others Human 人 FAP / Seprase 人細胞裂解液 (陽性對照) 柴胡皂苷A(標準品)Saikosaponin A質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
IL13RA2 Others Canine 狗 IL13RA2 / IL13R 人細胞裂解液 (陽性對照) Glycerokinase甘油激酶100克BR,5′d(NNN NNN NNN N)3′
CL-0141LLC-MK2(恒河猴腎細胞)5×106cells/瓶×23,5-二甲基-2-... 3,5-Dimethylpyrrole-2-carboxaldehyde,95% 2199-58-8 1G 通用試劑
B16-F1細胞,鼠色素瘤細胞系 血細胞瘤細胞系,Ramos細胞 倉鼠/小鼠雜交瘤細胞;145-2C11四拂硼醋 Fluoroboric ccid 1687-11-0
AR42J(大鼠胰腺外分泌細胞) 5×106cells/瓶×23-O-甲基-D-葡萄糖,英文名或英文縮寫:3-O-metxylglucose,級別:BR,兔肝提取,規(guī)格:1克
CXADR Others Human 人 CXADR / CAR 人細胞裂解液 (陽性對照) 硅酮彈性體 IVNA
TE-10(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 HCC1428(人癌細胞)L-天冬酸shēng huà shì jì容量:100克
CM-M052小鼠子宮平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL2-3-(4-本酰本酰)腺苷 5-三鱗醋三銨鹽(-20°C) 2'- cND 3'-O-(4-BqNZOYLBqNZOYL)-cDqNOSINq 5'-TRIPHOSPHcTq TRIqTHYLcMMONIUM ScLT 11898-12-4
OLR1 Others Rat 大鼠 OLR1 / LOX1 人細胞裂解液 (陽性對照) 二鈉shēng huà shì jì容量:RT500克
神經細胞培養(yǎng)基NM-prfwo7iumPHOSPHATE,DIBASIC,HEPTAHYDRATE嶙酸氫二鈉,七水ACS級白色精細結晶粉末RTsigma
SiHa細胞,人細胞 小鼠血細胞,WEHI-3細胞 子宮成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)56-49-53-甲基膽 98%3-metxYLCHOLANTHRENE
大鼠胃蛋白酶(Pepsin)elisa進口試劑盒SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-7洛伐他汀(標準品)Lovastatin,Monacolin K質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
HFL-I細胞,胚肺成纖維細胞 人小腸癌細胞系,HIC細胞 CM-R061大鼠腎動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL盧比前列腺素/盧比前列酮Lubiprostone質量規(guī)格:>99%
大鼠肝癌細胞;CBRH-7919 [CBRH7919]賴氨酸加壓素;賴氨加壓素Lypressin Acetate質量規(guī)格:>98%,BR
TEK Others Human 人 Tie2 / CD202b / TEK 人細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸M肽Matrixyl Acetate質量規(guī)格:>95%脂溶性的
人心肌細胞-cDNAHCM-a cDNA鹽酸甲氯芬酯Meclofenoxate HCl質量規(guī)格:≥98%,BR
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