HG TaqMan miRNA反轉錄試劑盒

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描述： TaqMan miRNA 反轉錄試劑盒采用加 A 法進行反轉錄，加 A 法的反轉錄效率遠高于莖環(huán)法，因 此，采用該方法可極大的提高檢測靈敏度（原理見圖 1）。 該試劑盒操作簡單，僅需要兩步即可輕松完成 miRNA 的 cDNA 合成，合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后續(xù)定 量檢測。反轉錄完畢后采用特異性的上游引物和接頭引物 進行 PCR 擴增，F(xiàn)AM 標記 TaqMan 探針作為熒光報告基 團進行定量檢測（原理見圖 1）。  TaqMan miRNA 反轉錄試劑盒專用于 miRNAs 分子的反轉錄試驗，轉錄獲得的 cDNA 產物用于 TaqMan 定量 PCR 方法檢測 miRNAs 分子

儲存：請置于-20°C，可保存 2 年；避免反復凍融
操作方法
1 按以下組分在 0.2 ml EP 管中配制應液
miRNA （5～100 ng/μl） 4 μl
5×TaqMan miRNA RT Solution A 1 μl
注意：不建議使用 Total RNA，Total RNA 試驗結果通常差
于 miRNA。
2 在 PCR 儀上按以下條件進行加 A 反應:
 37°C 30min
 85°C 5min
3 反應完畢后，在上述 5μl 反應體系中加入如下試劑，并
混合均勻。
10×TaqMan miRNA RT Primer 2 μl
10×TaqMan miRNA RT Solution B 2 μl
H2O 11 μl
4 在 PCR 儀上按以下條件進行反轉錄反應:
 30°C 5min
55°C 60min
 95°C 5min
獲得的 cDNA 產物可用于多個目標 miRNA 的檢測。反轉錄完畢后獲得的 miRNA cDNA，可加入 20~80μl ddH20 稀釋2~5 倍，通常取 2μl 即可用于 HG TaqMan miRNA 定量 PCR試劑盒檢測。

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