特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:沙門氏菌SPP-spec核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:BJP64677
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
12-O-Tiglylphorbol-13 –isob...英文名稱: Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate產(chǎn)品別名: 2-溴-3-氯吡啶
13-氧-(9E,11E)-十八碳二烯酸英文名稱: TTC,TTZ,Tetrazolium Red產(chǎn)品別名: 2,3,4-三氟溴苯
14α-羥基Sprengerinin C英文名稱: Sulfamethoxypyridazine產(chǎn)品別名: 2-氨基-7-氧代-4,5,6,7-四氫-1-苯并噻吩-3-羧酸乙酯
15-羥基松香酸(標準品)英文名稱: Sulfamethoxypyridazine產(chǎn)品別名: D-(+)-乳酸甲酯
16α-Hydroxytrametenolic aci...英文名稱: TCEP; hydrochloride產(chǎn)品別名: Fura-2 ethyl ester
16α-羥基松苓新酸英文名稱: Sodium thiosulfate, pentahydrate產(chǎn)品別名: 對環(huán)己酮甲酸乙酯
17-Hydroxy sprengerinin C英文名稱: Sodium iodide產(chǎn)品別名: 2-甲基丁
2''-O-p-反式香豆?;嚥蒈沼⑽拿Q: Starch soluble產(chǎn)品別名: 1,6-萘二磺酸二鈉鹽
2''-O-p-香豆酰基牡荊素英文名稱: Lithium acetate dihydrate產(chǎn)品別名: N-芐基馬來酰亞
2''-O-鼠李糖基羊藿次苷II英文名稱: Ficol 400產(chǎn)品別名: 左旋苯甘氨酸鄧鹽
2'-O-甲基苦參酮英文名稱: 3,5-Dinitrosalicylic acid產(chǎn)品別名: N-基乙亞氨酸乙酯
2,3,5,4-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷,二苯乙烯苷英文名稱: Sodium malonate產(chǎn)品別名: 2,3-二溴
肌肉素抗體 (S)-3’’-Hydroxy Pravastatin Sodium Salt 質(zhì)量規(guī)格:IND
代謝型谷氨酸受體-3抗體 Pravastatin 1,1,3,3-Tetramethylbutylamine 質(zhì)量規(guī)格:IND
促代謝型谷氨酸受體2+3抗體 Pravastatin Lactone 質(zhì)量規(guī)格:ACS reagent,95 %
促代謝型谷氨酸受體1+5抗體 Prednisolone-d6 質(zhì)量規(guī)格:指示劑
MHC I類鏈相關(guān)蛋白A/組織相容性復(fù)合物MHCIa抗體 Prednisolone 21-hemisuccinate sodium salt 質(zhì)量規(guī)格:IND
肌肉特異性環(huán)指蛋白2抗體 6α-Methylprednisolone 21-Acetate 質(zhì)量規(guī)格:ACS
肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體 Quetiapine Hemifumarate Labeled d8 質(zhì)量規(guī)格:BS
磷酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶抗體 Quetiapine Dimer Impurity 質(zhì)量規(guī)格:IND
絲裂原活化蛋白激酶13抗體 Quetiapine Hydroxy Impurity 質(zhì)量規(guī)格:BS
沙門氏菌SPP-spec核酸檢測試劑盒天津李時珍氏菌 MKL1(MKL/myocardin-like protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Lishizhenia tianjinensis
金格桿菌 MITD1 ELISA Kit拉丁屬名: Kingella kingae
橄欖色硬膜鏈霉菌 Mitofilin ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces olivaceiscleroticus
粉樹孢 F12(Coagulation factor XII) ELISA Kit僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
Sphingomonas panni MKNK2 ELISA Kit僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
魯氏接合酵母 MFN1 ELISA Kit拉丁屬名: Zygosaccharomyces rouxii
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇) METT10D ELISA Kit拉丁屬名: Agaricus bisporus (Lange) Singer
漢遜德巴利酵母 MED4 ELISA Kit拉丁屬名: Debaryomyces hansenii
蘇云金芽胞桿菌熊本亞種 MED6 ELISA Kit僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用