參數規(guī)格：
產品名稱：轉基因油菜品系RT-73核酸檢測試劑盒
產品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產品貨號：FS-P10757
產品分類：熒光探針法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。
 -1565℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

喜冷冷桿菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

曲霉屬培養(yǎng)基: CM0014抗癌活性提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥

熒光假單胞菌生長條件: 30℃培養(yǎng)基: 0002提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

 ivcas7.00596培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no種屬: Paenibacillus│macerans提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

維氏氣單胞菌生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 598提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

根瘤菌固氮模式菌株: no厚莢相思根瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 63生長條件: 28-30

 -1566℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

鰒發(fā)光桿菌共生微生物/赤點石斑魚腸道共生菌；指示菌/發(fā)光細菌模式菌株: no生物樣/赤點石斑魚腸體內容物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 33生長條件: 28℃

 GIMJC032模式菌株: no安全等級: 1種屬: Enterobacter│cloacae植物養(yǎng)殖水提供形式: 斜面培養(yǎng)物培養(yǎng)基: 0002生長條件: 33℃

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077釀造白酒、酒精。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

皮狀假絲酵母生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

ATCC49725=CCUG28779=CIP104783=DSM44278=KCTC3431=LMG19042模式菌株: yes安全等級: 2種屬: Corynebacterium accolensCervix提供形式: 凍干粉模式菌株培養(yǎng)基: 哥倫比亞血平板

茄鐮孢培養(yǎng)基: 14病原真菌，用于該菌種群遺傳學研究栓菌表面提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 25 定期移植法

 -1567℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

串珠鐮孢菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no根系提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 26 定期移植法

槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷Integrin Alpha5(ITG- AlphaV/CD49e)  粘附分子整合素α5抗原TRAF4/CART 1  腫瘤壞死因子受體相關蛋白4抗體

香葉木素-7-O-β-D-葡萄糖苷Integrin alpha V/CD51 peptide  整合素αV抗原TRAF3/CD40bp  腫瘤壞死因子受體相關蛋白3抗體

水仙苷; 異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷JAK1(Tyrosine-protein kinase JAK1; Janus kinase 1)  蛋白質酪氨激酶JAK-1抗原TRAF1  腫瘤壞死因子受體相關因子1抗體

芍藥內酯苷JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2; Janus kinase 2; JAK-2)  蛋白質酪氨激酶JAK-2抗原TRADD  腫瘤壞死因子受體1相關死亡域蛋白抗體

素phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008)  磷化蛋白酪氨激酶JAK-2抗原TRAC1/RNF125  環(huán)指蛋白125抗體

白蠟樹素；涔皮素JNK1/3 (c-Jun amino-terminal kinase 1/3)  c-Jun氨基末端激酶1/3多肽抗原TRA16  激素受體相關蛋白16抗體

環(huán)氧澤瀉烯phospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) peptide  磷化氨基末端激酶1/2/3（pJNK1/2/3）抗原TRA16  激素孤兒受體相關蛋白抗體

N-甲基野靛堿Ki-67(Antigen identified by monoclonal antibody Ki 67)  Ki-67 AntigenTPX2  微管相關同源蛋白TPX2抗體

硫金雀花堿Klf4 (Kruppel likefactor 4)  腸道內富含的Kruppel樣因子抗原TPTE  腫瘤/抗原44抗體

百蕊草素I；山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷；阿福豆苷phospho-KLF5/Krueppel-like factor 5 (pSer272)  磷化腸道內富含的Kruppel樣因子5抗原TPST2  酪蛋白硫轉移酶2抗體
轉基因油菜品系RT-73核酸檢測試劑盒RanitidineHCl　鹽雷尼替丁　質量規(guī)格：>98%,BR

RanitidineHCl　鹽雷尼替丁(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

Fluoresceindisodiumsalt　熒光素鈉　質量規(guī)格：>98%,BR

D-Luciferinsodiumsalt　D-蟲熒光素鈉鹽;D-熒光素鈉鹽　質量規(guī)格：>98%,BR

2',7'-DichlorofluoresceinSodiumSalt　2ˊ,7ˊ-二熒光素鈉鹽　質量規(guī)格：>98%,BR

AzureI　天青I;天青B　質量規(guī)格：>98%,BR

AzureII　天青II　質量規(guī)格：>98%,BR

AzureAchloride　天青A　質量規(guī)格：>98%,BR

Triclosan　三生　質量規(guī)格：>98%,BR

Resazurin　刃天青/樹脂天青/刃天青鈉　質量規(guī)格：>98%,BR

Celestineblue　天青石藍　質量規(guī)格：>98%,BR

AzureBeosinate　天青B曙紅　質量規(guī)格：>98%,BR

Limaprost　利馬前列素　質量規(guī)格：>98%,BR

AzureIIeosinate　天青II曙紅　質量規(guī)格：>98%,BR

FilipincomplexfromStreptomycesfilipinensis　菲律賓菌素;非律平;Filipin　質量規(guī)格：>98%,BR
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現Smear。