特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號(hào) |
流感病毒N8亞型核酸檢測(cè)試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P9643 |
PCR技術(shù)的定量原理:?
擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
PCR檢測(cè)試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
BALB/C小鼠肝上皮;BNL1MEA.7R.1形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Mouse IL-11 ELISA KIT
人鱗癌(高分化);HCC-94[HCC941122;HCC94]形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human EPOR ELISA KIT
小鼠畸胎瘤;F9形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Mouse IL-38 ELISA KIT
人膽管型肝癌;HCCC-9810形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human Amphiregulin ELISA KIT
人胃癌;HGC-27形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Mouse M-CSF ELISA KIT
人卵巢癌;HO-8910形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human ADAM15 ELISA KIT
人高轉(zhuǎn)移卵巢癌;HO-8910PM形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human FGF-21 ELISA KIT
人肺鱗癌;LTEP-s形態(tài)特性: 多邊形上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human SULT1E1 ELISA KIT
人腎上腺神經(jīng)母瘤(腦轉(zhuǎn)移);KP-N-NS形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human GDNF ELISA KIT
小鼠網(wǎng)織肉瘤;M5076形態(tài)特性: 梭形生長(zhǎng)特性: 半懸浮生長(zhǎng),貼壁呈短梭形。Human BCAM ELISA KIT
人神經(jīng)母瘤;IMR-32形態(tài)特性: 存在兩種類型,小的神經(jīng)母樣和大的透明成纖維樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Canine (dog) TNF-alpha ELISA Kit
人小肺癌;LTEP-sm形態(tài)特性: 上皮樣,多邊形及圓形生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human LAB7-1 ELISA KIT
牛腎;MDBK形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human E-cadherin ELISA KIT
人腎上腺腺瘤;NCI-H295形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Mouse MIP-1α ELISA KIT
小鼠神經(jīng)母瘤;Neuro-2a[N2a;Neuro-2a]形態(tài)特性: 神經(jīng)和阿米巴樣干生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human Klotho ELISA KIT
人腎癌;OS-RC-2形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human MIF ELISA KIT
流感病毒N8亞型核酸檢測(cè)試劑盒小鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒ADPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒ADPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒ADRA1AELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒ADRA1AELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒ADRA1AELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA試劑盒ADRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒ADRPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒ADV-AgELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。