ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
產(chǎn)品名稱 | AMA人抗心肌抗體ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Anti-myocardial antibody, AMA Elisa Kit |
貨號 | FS-H63512 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等?
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Sphingobacrium│siyangensis 泗陽鞘鞍醇桿菌Sphingobacrium│siyangensis分離基物:土壤斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no分類、研究,可以用來生物肥料。65生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;礦物油法 純度:99%
Enrobacr│asburiae 阿氏腸桿菌Enrobacr│asburiae分離基物:禾本科牧草圓果雀稗莖凍干物安全等級:1模式菌株:no研究3生長條件:30℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;礦物油法 純度:98%
Arthrobacr│globiformis 球形節(jié)桿菌Arthrobacr│globiformis凍干物安全等級:12生長條件:26℃存儲條件:真空冷凍干燥法;礦物油法;定期移植法 純度:99%
Cryptococcus neoformans 新型隱球酵母(新型隱球菌)Cryptococcus neoformans斜面培養(yǎng)物安全等級:1YM培養(yǎng)基:酵母提取物 3.0 g,麥芽提取物 3.0 g, 葡萄糖 10.0 g, 蛋白棟 5.0 g, 瓊脂 20.0 g, 蒸餾 1000 ml, pH 6.2 +/- 0.2。121℃,15min。生長條件:26℃,好氧存儲條件:真空冷凍干燥法;礦物油法 純度:97%
Alrnaria solani 茄鏈格孢(番茄早疫病菌)(斜面)Alrnaria solani形態(tài)菌絲體全部埋生或部分表身生。菌絲無色至褐色。很少形成子座,無剛毛及附屬枝。分生孢子梗淡褐色至褐色,單枝或不規(guī)則分枝,短或長,彎曲或呈屈膝狀。產(chǎn)孢孔出式產(chǎn)孢,合軸式延伸或不再延伸,孢痕明顯。分生孢子呈鏈狀或單生,淡褐色至深褐色,形狀不一,表面光滑或具微,有縱橫隔膜,頂端常具喙。菌絲有隔膜和分枝,較老的顏色較深。分生孢子梗直立或稍彎曲,色深而短,單生或叢生,有1-7個隔膜,大為50-90um ×6-9um.分生孢子自分生抱子梗頂端產(chǎn)生,通常單生,其形狀差異很大,倒棍棒形至長橢圓形,顏色為淡金黃色至欖褐色,具長嚎,表面光滑,9-11個橫隔膜,0到數(shù)個縱隔膜,大為117-154um ×9.8-15.7um,嚎長等于或長于孢身,有時有分枝,嚎寬2. 5-5um。分離基物:番茄葉片凍干安全等級:1模式菌株:no教學科研綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。生長條件:25-28℃,好氧。存儲條件:2-8℃。 純度:97%
Phellinus igniariu 火木層孔菌(桑黃)(斜面)Phellinus igniariu斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。生長條件:25℃,好氧生長特性@BNCC此菌在綜合PDA平板,圓桶形或近球形,橙黃色菌絲,好氧,28℃,不產(chǎn)孢子。 純度:98%
Gluconobacr│oxydans 氧化葡萄糖桿菌Gluconobacr│oxydans凍干物安全等級:1230生長條件:26℃存儲條件:真空冷凍干燥法;礦物油法;定期移植法 純度:98%
Paenibacillus│slifer 星孢類芽孢桿菌Paenibacillus│slifer分離基物:土壤斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no分類、研究,可以用來生物肥料。65生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;礦物油法 純度:98%
AMA人抗心肌抗體ELISA試劑盒實驗原理Phospho-FoxO1 (Ser319) 磷化叉頭蛋白家族1抗體狼(月腺大戟)四對苯二甲Human IDUα (Alpha-L-Iduronidase) ELISA Kit
Phospho-FoxO1 (Ser256) 磷化叉頭蛋白家族1抗體湖北貝母2,6-二苯Human NAGLU (N-Acetyl Alpha-D-Glucosaminidase) ELISA Kit
FOXO3A 叉頭蛋白O3A抗體干蟾皮2,6-二苯Human GLα (Galactosidase Alpha) ELISA Kit
Phospho-FoxO3a (Ser318/321) 磷化叉頭蛋白3A抗體千里光二-μ-雙[2-[(二甲)]苯基-C,N]二鈀(Ⅱ)Human α-GST (α-glutathione S-transferases) ELISA Kit
Phospho-FoxO3a (Ser294) 叉頭蛋白3A抗體仙鶴草5-溴-2-糖Human α-SCA (α-sarcomeric Actin) ELISA Kit
Phospho-FoxO3a (Ser253) 磷化叉頭蛋白3A抗體沒藥(天然沒藥)5-溴-2-糖Human α Actin (Alpha-Actin) ELISA Kit
FOXO4 叉頭蛋白O4抗體靈芝(赤芝)5-溴-2-糖Human α-Glu (Alpha Glucosidase) ELISA Kit
Phospho-FoxO4 (Ser193) 磷化叉頭蛋白4抗體陳皮檸檬二氫Human αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準