服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 分類(lèi) | 貨號(hào) |
登革病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P9963 |
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
Pleurotus ostreatus (Jacquin : Fries) Kumme ..名稱(chēng): 人卵巢癌；CoC1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Felis catus, cat submandibular lymph node名稱(chēng): 人卵巢癌CoC1順鉑耐藥亞株；CoC1/DDP RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Penicillium sajarovii Quintanilla, anamorph名稱(chēng): 人卵巢癌；Caov-4 L15:LeibovitzMedium20%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱(chēng): 人burkitt淋巴瘤；CA46 RPMI1640(w/oHepes)20%FBS
Acholeplasma laidlawii (Sabin) Edward and F ..名稱(chēng): 小鼠T淋巴瘤（雞OVA基因修飾）；E.G7-OVA RPMI1640(w/oHepes)10%FBS；0.05mM2-mercaptoethanol+0.4mg/mlG418
Phytophthora infestans (Montagne) de Bary名稱(chēng): 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤；H4 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Mycobacterium septicum Schinsky et al.名稱(chēng): 人卵巢透明癌；ES-2 McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
Schizophyllum fasciatum Patouillard名稱(chēng): 人永生化表皮；HaCaT MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)15%FBS
Pleurotus calyptratus (Lindblad apud Fries) ..名稱(chēng): 人整合SV40基因的上皮；HBL-100[HBL100] DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱(chēng): 大鼠腎小球系膜；HBZY-1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
Borrelia burgdorferi Johnson et al. emend. ..名稱(chēng): 人胰腺癌；HS766T DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Leptographium lundbergii Lagerberg et Melin名稱(chēng): 大鼠胰島瘤；INS-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS；50μmol/L2－巰
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..名稱(chēng): 人肝癌；Hep3b MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
frozen名稱(chēng): 人內(nèi)膜腺癌；KLE DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS
Rhodococcus rhodochrous (Zopf) Tsukamura em ..名稱(chēng): 人癌；MDA-MB-361 L15:LeibovitzMedium20%FBS
Yarrowia lipolytica (Wickerham et al.) van ..名稱(chēng): 人淋巴母（EBV轉(zhuǎn)化）；NCI-BL2009 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
登革病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒PF-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒PF-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒PFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒PFKELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒PG-AELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA試劑盒PG-CELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒PGD2-MOXELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒PGDSELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
