公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
產(chǎn)品名稱 | MPP 89人間皮瘤細(xì)胞 | 貨號(hào) | AXB6466 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | MPP 89 |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬(wàn) 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō),每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過(guò)夜(如果沒(méi)有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過(guò)大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時(shí),吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過(guò)表達(dá)效率。
公司正在出售的產(chǎn)品:
Ai-Phospho-MKK3 (Ser189)/MKK6 (Ser207) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化原活化蛋白激酶MKK3/6抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-TRAF1/FITC 熒光素標(biāo)記壞死因子受體相關(guān)因子1抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh ABHD5 自水解酶結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Ai-Avidin/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml
phospho-GSK-3 Beta(Thr390) 英文名稱: 0酸化糖原合酶激酶3β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh RAB9 ras癌基因家族Rab9蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Ai-TRAF1/FITC 熒光素標(biāo)記壞死因子受體相關(guān)因子1抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-Phospho-MYPT1 (Thr853) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化肌球蛋酸酶抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-TRH/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素釋放激素抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh ABCE1 核糖核酸酶L抑制蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse Ai-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml
phospho-GSK-3 Beta(Ser9) 英文名稱: 0酸化糖原合酶激酶-3β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Rab27a RAM-11抗體 規(guī)格 0.2ml
Ai-TRH/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素釋放激素抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-HisX6/FITC 熒光素標(biāo)記聚組抗體/抗His tag標(biāo)簽抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-PAK4/FITC 熒光素標(biāo)記p21激活激酶4抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh ATG9B 自噬相關(guān)蛋白9B抗體 規(guī)格 0.2ml
CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP) 瓜酸環(huán)肽 0.5mg
phospho-GSK-3 Beta(Ser21+Ser29) 英文名稱: 0酸化糖原合酶激酶3β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Rabbit Ai-mouse IgM/AP 堿性0酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml
Ai-PAK4/FITC 熒光素標(biāo)記p21激活激酶4抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-Histone H3/FITC 熒光素標(biāo)記抗組蛋白抗體(AHA)IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-phospho-PAK2(pSer141)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化p21激活激酶2抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh ATP4B 氫ATP酶通道蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
MBP(Myelin Basic Protein, MBP 68-86) 髓鞘堿性蛋白(多肽抗原) 0.5mg
phospho-GSK-3 Beta(Ser21) 英文名稱: 0酸化糖原合酶激酶3β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Rabbit Ai-mouse IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml
Ai-phospho-PAK2(pSer141)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化p21激活激酶2抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
MPP 89人間皮瘤細(xì)胞Ai-Inhibin BetaA/FITC 熒光素標(biāo)記抑制素βA抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-ROS/FITC 熒光素標(biāo)記活性氧簇ROS抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh ANKS1B/AIDA1 β淀粉樣蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Ai-mouse IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
phospho-GSK3 Beta (Tyr216) 英文名稱: 0酸化糖原合酶激酶3β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Rabbit Ai-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
Ai-ROS/FITC 熒光素標(biāo)記活性氧簇ROS抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml