問:常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些?
miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL品牌稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會偏低,因為pH 值和離子存在會影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長片段回收時應(yīng)注意哪些問題?
答:miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL品牌當DNA 段長度較長(5 kb 以上)時,回收效率會有所下降,這是DNA 切膠回收時的常見現(xiàn)象。此時建議按以下方法解決問題:
1 適當增加待回收DNA 樣品的點樣量;
2 由于長段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對長段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL品牌的詳細介紹:
DNA提取流程圖:
公司miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL品牌的RNA/DNA提取目錄有下面10個系列,5000余種產(chǎn)品:點擊了解更核酸電泳及回收。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標記及檢測系列產(chǎn)品
5、核酸擴增系列產(chǎn)品
6、克隆表達系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫、菌種庫等等
實驗步驟:
(1)miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL品牌實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
注意事項:
● miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL品牌溶液PE *次使用前請按瓶上標簽加入4 倍體積的無水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請適當延長電泳時間,在條帶分離清晰后進行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會影響后續(xù)試驗。
● 為了保證回收效率,請不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請嚴格按照操作步驟操作。
胰酶(1:4500) Pancreatin 8049-47-6 質(zhì)量規(guī)格:酶活1:4500,BR
胰酶(1:2500) Pancreatin 8049-47-6 質(zhì)量規(guī)格:酶活1:2500,BR
胰酶(1:250),胰酶粉 Pancreatin 8049-47-6 質(zhì)量規(guī)格:酶活1:250,BR
胰高血糖素樣肽Ⅰ(7-36)酰胺,人 Glucagon-Like Peptide I (7-36),amide, human 107444-51-9 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
胰高血糖素樣肽-2(1-34),人 GLP-2 (1-34) (human) 99120-49-7 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
胰高血糖素(19-29),牛,人,豬 Glucagon (19 - 29), bovine,human, porcine 64790-15-4 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
胰高血糖素(1-29),牛,人,豬 Glucagon (1 - 29), bovine,human, porcine 16941-32-5 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
胰多肽,人 Pancreatic Polypeptide,human 75976-10-2 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
胰多肽,大鼠 Pancreatic Polypeptide, rat 90419-12-8 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
胰島素樣生長因子I(57-70) Insulin-like Growth Factor I (57-70) 18285 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
胰島素樣生長因子Ⅱ(69-84) Insulin-Like Growth Factor II(69-84) 50-01-37 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
胰島素(豬) INSULIN 12584-58-6 質(zhì)量規(guī)格:BR,來源豬胰臟
胰島素(牛) INSULIN 11070-73-8 質(zhì)量規(guī)格:BR,27U/mg,進分
胰島素(牛) INSULIN 11070-73-8 質(zhì)量規(guī)格:BR,27U/mg,進分
胰蛋白酶原 Trypsinogen >2500U/mg from bovine pancreas 2594173 質(zhì)量規(guī)格:BC
胰蛋白酶1:2500 Trypsin 1:2500 from Porcine pancreas 2594141 質(zhì)量規(guī)格:>2500U/MG
胰蛋白酶1:250 Trypsin 1:250 fromPorcine pancreas 2594141 質(zhì)量規(guī)格:>250U/mg,BR
胰蛋白胨(BD) Tryptone 73049-73-7 質(zhì)量規(guī)格:BD 211705
胰蛋白胨 Tryptone 73049-73-7 質(zhì)量規(guī)格:FMB Grade
miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL品牌Kinetensin規(guī)格:>95%,BR
KieselguhrG規(guī)格:TLC
Khasianine規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
Ketotifenfumarate規(guī)格:>99%,BR
Ketotifenfumarate規(guī)格:HPLC>98%,標準品
Ketotifenfumarate規(guī)格:含量測定
KetorolacTromethamine規(guī)格:>98.5%,USP,BR
KetorolacTromethamine規(guī)格:HPLC>98%,標準品
Ketorolac規(guī)格:>98%
Ketoprofen規(guī)格:>99%,AR