問(wèn):常用的DNA 濃度及純度檢測(cè)方法有哪些?
電泳級(jí)甘油100mL品牌稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過(guò)對(duì)比定量的Marker 來(lái)定量濃度;紫外分光檢測(cè)OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說(shuō)明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時(shí)不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但不表示純度低。
問(wèn):長(zhǎng)片段回收時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題?
答:電泳級(jí)甘油100mL品牌當(dāng)DNA 段長(zhǎng)度較長(zhǎng)(5 kb 以上)時(shí),回收效率會(huì)有所下降,這是DNA 切膠回收時(shí)的常見(jiàn)現(xiàn)象。此時(shí)建議按以下方法解決問(wèn)題:
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量;
2 由于長(zhǎng)段DNA 不易從樹(shù)脂上洗脫下來(lái),建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過(guò)程中對(duì)長(zhǎng)段DNA 的物理?yè)p傷,如混合振蕩操作不要過(guò)于劇烈,切膠時(shí)不要將DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外等下。
電泳級(jí)甘油100mL品牌的詳細(xì)介紹:
DNA提取流程圖:
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公司電泳級(jí)甘油100mL品牌的RNA/DNA提取目錄有下面10個(gè)系列,5000余種產(chǎn)品:點(diǎn)擊了解更核酸電泳及回收。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測(cè)系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫(kù)、菌種庫(kù)等等
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)電泳級(jí)甘油100mL品牌實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
注意事項(xiàng):
● 電泳級(jí)甘油100mL品牌溶液PE *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無(wú)水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無(wú)水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無(wú)水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對(duì)電泳使用的Agarose 種類沒(méi)有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒(méi)有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時(shí)請(qǐng)使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時(shí)應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會(huì)偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率,請(qǐng)不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。
去氟比卡魯胺 Desfluoro Bicalutamide 90357-05-4 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
去二甲基氯化西酞普蘭鹽酸鹽 Didemethylchloro Citalopram Hydrochloride 887354-48-5 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
去丁基鹽酸決奈達(dá)隆-d6 Desbutyl Dronedarone-d6 HCl 141626-35-9 (unlabeled) 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
去氨加壓素;去氨壓素 Desmopressin Acetate 16789-98-3;16679-58-6(base) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,醋酸鹽形式
去-4-氟代芐基莫沙必利 Des-4-fluorobenzyl Mosapride 152013-26-8 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
去[5-(2-二甲氨基)乙基]地爾硫卓 Des[5-(2-dimethylamino)ethyl] Diltiazem 87447-47-0 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
曲唑酮鹽酸鹽-d6 Trazodone-d6 Hydrochloride 1181578-71-1 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
曲昔匹特(標(biāo)準(zhǔn)品) Troxipide 30751-05-4 (99777-81-8) 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
曲沃前列素 Travoprost 157283-68-6 質(zhì)量規(guī)格:含>99.0%
曲司氯銨 Trospium chloride 10405-02-4 質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP6,BR
曲匹地爾(標(biāo)準(zhǔn)品) Trapidil 15421-84-8 質(zhì)量規(guī)格:供鑒別用
曲匹布通(標(biāo)準(zhǔn)品) Trepibutone 41826-92-0 質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定
曲尼司特(標(biāo)準(zhǔn)品) Tranilast 53902-12-8 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
曲尼司特 Tranilast 53902-12-8 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%
曲美替尼 Trametinib (GSK1120212) 871700-17-3 質(zhì)量規(guī)格:>99%,MEK抑制劑
曲美布汀堿 Trimebutine base 39133-31-8 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
曲洛司坦/ 亞硝酸鹽環(huán)氧雄烷 Trilostane 13647-35-3 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR
曲洛司坦(標(biāo)準(zhǔn)品) Trilostane 13647-35-3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
曲利苯藍(lán) Trypan Blue 72-57-1 質(zhì)量規(guī)格:BS
電泳級(jí)甘油100mL品牌ErythromycinEstolate規(guī)格:含量測(cè)定
ErythromycinC規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
ErythromycinB規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
ErythromycinAEnolEther規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
ErythromycinAdihydrate規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
Erythromycin規(guī)格:≥850μg/mg,BR
Erythromycin規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測(cè)定
Erythritol規(guī)格:>99%,BR
Erucicacid規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
Ertapenemsodium規(guī)格:含量>90%,單鈉鹽