實驗操作步驟：
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動物。
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
公司向您推薦Primarker™人前脂肪細(xì)胞鑒定試劑盒說明書的詳細(xì)說明：
產(chǎn)品名稱 | Primarker™人前脂肪細(xì)胞鑒定試劑盒說明書 |
規(guī)格 | 6次/盒 |
貨號 | YS-X6932 |
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
組織基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-1）活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
石蠟切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
食物糖精（saccharin）含量紫外光譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄酶（REVERSE TRANSCREPTASE）活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
植物核糖體分離試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次
血人類巨細(xì)胞病毒蛋白酶（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
冰凍切片組織線粒體復(fù)合物III蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
通用型賴氨酸（lysine）含量熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
組織PCTA1RE1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
石蠟切片組織線粒體復(fù)合物II蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
細(xì)胞亮氨酸（leucine）含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
Primarker™人前脂肪細(xì)胞鑒定試劑盒說明書嗜熱側(cè)孢霉
改良緩沖/PSB用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌冷增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口
無菌豬血清/Sterile Defidrinated Pig BloodBR100/400毫升國產(chǎn)/進(jìn)口
A549全細(xì)胞裂解100μg100μg
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
嗜酸桿菌 Lactobacillus acidophilusCHO, 中國倉鼠卵巢細(xì)胞系
CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株)骨肉瘤
胱天蛋白酶激活脫氧核糖核酸酶(CAD)重組蛋白英文名稱：Recombinant Caspase Activated DNase (CAD)
大鼠冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
293(人胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠漢坦病毒抗體（HV-Ab）ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
