參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:即用型PCR試劑盒3.0(2X PCR MagicMix)
產(chǎn)品貨號:YS-P013267
產(chǎn)品規(guī)格: 1 mL×10
產(chǎn)品分類:PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.公司產(chǎn)品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。
人γ谷氨酰轉移酶1(γGT1)卡格列凈;坎格列凈激素受體相關蛋白16抗體
人阿黑皮素原(POMC)苯駢三氮唑(BTA,1,2,3-苯駢三氮唑)β淀粉樣肽1-40 C端/Aβ1-40 C端抗體
人食欲素A/阿立新A(OXA)鹽酸倍他司汀含錨蛋白重復序列-因子信號抑制物盒蛋白家族13抗體
人磷酸肌-3-激酶催化亞基β肽(PIK3Cβ)鹽酸倍他司?。藴势罚│碌矸蹣与模?1-35)/Aβ 31-35 抗體
人癌蛋白誘導轉錄物3(OIT3)甲磺酸倍他司汀β淀粉樣肽 1-40(C端)抗體
人磷酸肌-3-激酶催化亞基σ肽(PIK3Cσ)胰島素(豬)β-抑制蛋白2抗體/β休止蛋白2/β-arrestin抗體
人八聚體結合轉錄因子1(OBTF1)氧化鉍炭疽桿菌抗體
人八聚體結合轉錄因子2(OBTF2)2-氯-1,3-腎上腺皮質發(fā)育異常蛋白抗體
人八聚體結合轉錄因子4(OCT4)富馬酸比索洛爾血管緊張素Ⅱ1A型受體抗體
人八聚體轉錄因子2A(OTF2A) 鹽酸溴己新ABI1/SSH3BP1蛋白抗體
人八聚體轉錄因子2B(OTF2B) 鹽酸布因乙?;M蛋白H1b抗體
人靶向核糖核酸酶(TR)鹽酸布(標準品)磷酸化雄激素受體抗體
人過氧化還原酶5(PRDX5)鹽酸布替萘芬多功能DNA修復酶抗體
人白介素1受體Ⅰ(IL1R1)卡托普利AP2關聯(lián)激酶1抗體
人XII B組磷脂酶A2(PLA2G12B)卡托普利(標準品)水通道蛋白1抗體
人白介素2受體α(IL-2Rα/CD25)卡比多巴AATK凋亡關聯(lián)酪氨酸激酶抗體
即用型PCR試劑盒3.0(2X PCR MagicMix)CBP/CREBBP CREB結合蛋白抗體草酸 ≥99.9999% (metals basis)
HP1 gamma 異染色質蛋白1-γ抗體四十八烷 Standard for GC,≥99.0% (GC)
Phospho-HP1 gamma (Ser83) 磷酸化染色質相關蛋白1-γ抗體α-氧代-2-呋喃乙酸 97%
CBX5 CBX5抗體奧美拉唑
Cbx8 染色質結合蛋白Cbx8抗體對羥基聯(lián)苯 分析標準品,用于環(huán)境分析
CCK8 膽囊收縮素抗體棕櫚酸棕櫚酯 98%
CC16 克拉拉蛋白抗體棕櫚酸棕櫚酯 95%
CCP 瓜氨酸環(huán)肽抗體藍五號鈉鹽 80%
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。