微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境,不利于形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進罐,常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng),有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級種子,把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級種子,將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱為四級發(fā)酵。
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產(chǎn)品名稱 | 用途 | 貨號 |
金龜子綠僵菌 | 僅供科研 | GOY-01J6826
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菌種的培養(yǎng):
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法。
(親和純化) 牛IgGAnti-ISL2 Antibody小鼠前列腺素氧化環(huán)化1(PTGS1)elisa定量檢測試劑盒
熒光素標記牛血清白蛋白Anti-ITGA2 Antibody小鼠信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄激活子1(STAT1)elisa定量檢測試劑盒
羅丹明標記牛血清白蛋白Anti-ITPKA Antibody小鼠糖抗原125(CA125)elisa定量檢測試劑盒
羅丹明標記狗IgMAnti-ITGAD Antibody小鼠信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄激活子6B(STAT6B)elisa定量檢測試劑盒
熒光素Cy3標記狗IgMAnti-ITIH2 Antibody小鼠神經(jīng)生長導向因子(Slit2) elisa定量檢測試劑盒
熒光素PE標記狗IgGAnti-ITPK1 Antibody小鼠信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄激活子6(STAT6)elisa定量檢測試劑盒
兔抗熒光素Anti-ITPKC Antibody小鼠脊髓灰質(zhì)炎病受體相關(guān)蛋白3(PVRL3)elisa定量檢測試劑盒
羊IgGAnti-JAK2 Antibody小鼠信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄激活子2(STAT2)elisa定量檢測試劑盒
金龜子綠僵菌間 GR,99%phospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E) 化eIF-4E(Ser209)抗原猴顆粒K(GZMK)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙乙烯酯 99.0%ELK1 轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原猴跨膜絲氨蛋白2(TMPRSS2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙 98%Elastin 彈性蛋白抗原猴髓分化因子88(MYD88)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
二二酯 98%ELAVL1/HuR peptide ELAVL1/HuR多肽抗原猴白活化黏附因子(ALCAM)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
二二乙酯 99%Emp1 (epithelial membrane protein 1) 表皮膜蛋白1抗原猴骨成型蛋白受體II(BMPR2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
二二異酯 99%sFRP-4(Secreted frizzled-related protein 4; Frizzled protein, human endometrium) 抗內(nèi)膜抗原猴肌鈣蛋白C2 (TNNC2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雙酮烯酰 99%Endostatin 內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗原猴促狀腺素(TSH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三乙酯 97%EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule) 上皮粘附分子/表皮粘附分子(多肽)猴乙酰受體抗體(AChRab)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙酯 CP,98% EpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule) 上皮粘附分子/表皮粘附分子抗原猴成纖維生長因子9(FGF9)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙乙酯 99%E.coli O6 (Escherichia coli O6) E.coli O6大腸桿菌菌體蛋白猴組織多肽特異性抗原(TPS)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
酯 AR,99.0%EPEC/E.coli(enteropathogenic E.coli,EPEC) 普通大腸埃希菌菌體蛋白(非致病性)猴免疫球蛋白G1(IgG1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙酯 99%EphA1 R(Ephrin A1 Receptor) EphA1-R受體抗原猴酮脫氫α(PDHα)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
1,3-環(huán)己二酮 97%EPOR peptide 紅生成素受體抗原猴抗乙酰受體抗體(Anti-AChR)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
肼 AR,98.0%phospho-ERK1/MAPK-1/2(pThr183 + pTyr185) 化絲裂原活化蛋白激1/2抗原猴Rho GDP解離抑制因子α(ARHGDIα)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
三唑 分析標準品,>97%(HPLC)ERK(Extracellular signal-regulated kinase) 絲裂原活化蛋白激抗原猴周期素依賴性激6(CDK6)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒