服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
綿羊CYTB基因檢測試劑盒(熒光-PCR法) | 50T | YS-P014497 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)檢測試劑盒英文名稱：sRANKL ELISA Kit腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體包裝1g
可溶性Toll樣受體9(sTLR9/sCD289)檢測試劑盒英文名稱：sTLR9/sCD289 ELISA Kit腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體包裝25g
可溶性Toll樣受體4(sTLR4)檢測試劑盒英文名稱：sTLR4 ELISA Kit磷酸化周期末期促進復(fù)合蛋白APC1抗體包裝5g
可溶性Toll樣受體2(sTLR2)檢測試劑盒英文名稱：sTLR2 ELISA Kit周期末期促進復(fù)合蛋白APC1抗體包裝5g
可溶性P選擇素(sP-selectin)檢測試劑盒英文名稱：sP-selectin ELISA Kit磷酸化蛋白激酶B2抗體包裝25g
可溶性Endoglin(ENG/sCD105)檢測試劑盒英文名稱：ENG/sCD105 ELISA Kit磷酸化鐵蛋白Fe65抗體包裝5g
可溶性CD86(B7-2/sCD86)檢測試劑盒英文名稱：B7-2/sCD86 ELISA Kit磷酸化鐵蛋白Fe65抗體包裝25g
可溶性CD40配體(sCD40L)檢測試劑盒英文名稱：sCD40L ELISA Kit磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝5g
可溶性CD30配體(sCD30L)檢測試劑盒英文名稱：sCD30L ELISA Kit磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝100ml
可溶性CD30(sCD30)檢測試劑盒英文名稱：sCD30 ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體包裝500ml
顆粒酶B(Gzms-B)檢測試劑盒英文名稱：Gzms-B ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體包裝5MG
顆粒酶A(Gzms-A)檢測試劑盒英文名稱：Gzms-A ELISA Kit磷酸化周期末期促進復(fù)合蛋白APC1抗體包裝1g
抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)檢測試劑盒英文名稱：EMAb ELISA Kit發(fā)育分化增強因子1抗體包裝100g
抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)檢測試劑盒英文名稱：pANCA ELISA Kit磷酸化發(fā)育分化增強因子1抗體包裝25g
抗中性粒/中心體抗體(ACA)檢測試劑盒英文名稱：ACA ELISA Kit蛋白激酶B3包裝25ml
綿羊CYTB基因檢測試劑盒(熒光-PCR法)Collagenase I ELISA Kit 大鼠膠原酶I間二氯 99%
P-PKC ELISA Kit 大鼠磷酸化蛋白激酶C二二二 98%
pERK ELISA Kit 大鼠磷酸化外信號調(diào)節(jié)激酶二二二 for HPLC, ≥99%
cath-K ELISA Kit 大鼠組織蛋白酶K二二 standard for GC, ≥99.5% (GC)
AmAC-1 ELISA Kit 大鼠巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1二二 CP，95%
BMPs ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白二二 99%
RBP-4 ELISA Kit 大鼠視黃結(jié)合蛋白4二二 AR，99.5%（GC)
6-keto-PGF1a ELISA Kit 大鼠6酮前列腺素F1a二二 for HPLC, 99.5%
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
