組成及試劑配制:
1、非洲分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價(jià)格 |
非洲分枝桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無(wú)菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無(wú)菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測(cè),也可保存于-20℃待測(cè)。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對(duì)照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見該試劑盒說(shuō)明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽(yáng)性對(duì)照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測(cè)選擇:選用FAM通道。
Bcl3 ELISA Kit富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白3抗體B-細(xì)胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA試劑盒
Bcl2 ELISA Kit富含亮氨酸重復(fù)蛋白10抗體B-細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl2)ELISA試劑盒
Bcl10 ELISA Kit富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白2抗體B-細(xì)胞淋巴瘤因子10(Bcl10)ELISA試劑盒
BLNK ELISA Kit富含亮氨酸重復(fù)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體B-細(xì)胞連接蛋白(BLNK)ELISA試劑盒
BAFFR ELISA Kit層粘連蛋白受體1抗體B-細(xì)胞激活因子受體(BAFFR)ELISA試劑盒
BAFF ELISA Kit層粘連蛋白受體1抗體B-細(xì)胞激活因子(BAFF)ELISA試劑盒
IκBKβ ELISA Kit磷酸化淋巴增強(qiáng)因子-1抗體B-細(xì)胞κ-輕肽基因增強(qiáng)子抑制因子激酶β(IκBKβ)ELISA試劑盒
BLC1 ELISA Kit層粘連相關(guān)多肽蛋白1抗體B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC1)ELISA試劑盒
LAB7-2 ELISA Kit淺表層粘膜蛋白多糖抗體B-淋巴細(xì)胞激活抗原B7-2(LAB7-2)ELISA試劑盒
BLK ELISA Kit調(diào)控胚胎干細(xì)胞分化蛋白Lhx2抗體B-淋巴酪氨酸激酶(BLK)ELISA試劑盒
SCARB1 ELISA KitLRRC2蛋白抗體B類清道夫受體1(SCARB1)ELISA試劑盒
BAGE5 ELISA Kit神經(jīng)突觸蛋白NGL3抗體B-黑色素瘤抗原5(BAGE5)ELISA試劑盒
BAGE4 ELISA Kit致盲基因LCA5樣蛋白抗體B-黑色素瘤抗原4(BAGE4)ELISA試劑盒
BAGE3 ELISA Kit致盲基因LCA5蛋白抗體B-黑色素瘤抗原3(BAGE3)ELISA試劑盒
BAGE2 ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子LHX6抗體B-黑色素瘤抗原2(BAGE2)ELISA試劑盒
BAGE ELISA Kit磷酸化腫瘤抑制基因LATS1/LATS2抗體B-黑色素瘤抗原(BAGE)ELISA試劑盒
BANP ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子LBX1抗體BTG3關(guān)聯(lián)核蛋白(BANP)ELISA試劑盒
BRAF ELISA Kit神經(jīng)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子LDB1抗體B-Raf原癌基因絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(BRAF)ELISA試劑盒
BMPER ELISA Kit白細(xì)胞細(xì)胞化學(xué)吸引素2抗體BMP結(jié)合內(nèi)皮調(diào)節(jié)因子(BMPER)ELISA試劑盒
BAMBI ELISA KitLHX5蛋白抗體BMP激活素膜結(jié)合抑制因子同源物(BAMBI)ELISA試劑盒
BPn ELISA Kit單絲氨酸蛋白激酶1+2抗體Biopyrrin蛋白(BPn)ELISA試劑盒
Bid ELISA KitLIN7C蛋白抗體BH3相互作用域死亡激動(dòng)劑(Bid)ELISA試劑盒
BCL2L11 ELISA Kit富含亮氨酸重復(fù)序列Nogo受體反應(yīng)蛋白4抗體Bcl2樣蛋白11(BCL2L11)ELISA試劑盒
MCL1 ELISA Kit富含亮氨酸α2糖蛋白抗體Bcl2相關(guān)髓細(xì)胞白血病序列1(MCL1)ELISA試劑盒
BAK1 ELISA Kit腦特異性磷脂酸磷酸酶樣蛋白1抗體Bcl2拮抗/殺傷因子1(BAK1)ELISA試劑盒
BAG3 ELISA Kit跨膜蛋白TMEM176B抗體Bcl2關(guān)聯(lián)永生基因3(BAG3)ELISA試劑盒
Bax ELISA Kit富含亮氨酸重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白2抗體Bcl2關(guān)聯(lián)X蛋白(Bax)ELISA試劑盒
BTS ELISA Kit富含亮氨酸重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白4抗體Battenin蛋白(BTS)ELISA試劑盒
BSN ELISA KitLZIC蛋白抗體Bassoon蛋白(BSN)ELISA試劑盒
AXOT ELISA KitLgi3蛋白抗體Axotrophin蛋白(AXOT)ELISA試劑盒
AXIN2 ELISA KitLhx4蛋白抗體Axis抑制蛋白2(AXIN2)ELISA試劑盒
ATRN ELISA Kit信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SCDO3抗體Attractin蛋白(ATRN)ELISA試劑盒
ATN1 ELISA KitRNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體Atrophin1蛋白(ATN1)ELISA試劑盒
ABCG2 ELISA Kit淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒蛋白抗體ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G2(ABCG2)ELISA試劑盒
ABCG1 ELISA Kit自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3A/3B抗體ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1(ABCG1)ELISA試劑盒
ABCA4 ELISA Kit黃體激素釋放激素/促性腺激素釋放激素抗體ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A4(ABCA4)ELISA試劑盒
ABCA3 ELISA KitLRRC23蛋白抗體ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A3(ABCA3)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。