組成及試劑配制:
1、柯薩奇病毒A16型(CAV-16)核酸檢測(cè)試劑盒方法廠家酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價(jià)格 |
柯薩奇病毒A16型(CAV-16)核酸檢測(cè)試劑盒方法廠家 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測(cè),也可保存于-20℃待測(cè)。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對(duì)照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對(duì)照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測(cè)選擇:選用FAM通道。
MYO9B ELISA Kit高爾基體磷蛋白6抗體肌球蛋白ⅨB(MYO9B)ELISA試劑盒
MYO9A ELISA Kit高爾基SNAP受體復(fù)合物1抗體肌球蛋白ⅨA(MYO9A)ELISA試劑盒
MYO7B ELISA Kit谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶1樣蛋白1抗體肌球蛋白ⅦB(MYO7B)ELISA試劑盒
MYO7A ELISA KitG蛋白偶聯(lián)受體52抗體肌球蛋白ⅦA(MYO7A)ELISA試劑盒
MYO6 ELISA Kit核膜糖蛋白210抗體肌球蛋白Ⅵ(MYO6)ELISA試劑盒
MYO5C ELISA KitGADD153抗體肌球蛋白ⅤC(MYO5C)ELISA試劑盒
MYO5B ELISA KitG蛋白偶聯(lián)受體57抗體肌球蛋白ⅤB(MYO5B)ELISA試劑盒
MYO5A ELISA KitGSK-3結(jié)合蛋白FRAT2抗體肌球蛋白ⅤA(MYO5A)ELISA試劑盒
MYO3B ELISA Kit磷酸化內(nèi)收蛋白gamma抗體肌球蛋白ⅢB(MYO3B)ELISA試劑盒
MYO3A ELISA Kit生長因子受體結(jié)合適應(yīng)蛋白抗體肌球蛋白ⅢA(MYO3A)ELISA試劑盒
MYO1H ELISA KitGARNL3蛋白抗體肌球蛋白ⅠH(MYO1H)ELISA試劑盒
MYO1G ELISA KitTuberin樣蛋白1抗體肌球蛋白ⅠG(MYO1G)ELISA試劑盒
MYO1F ELISA KitX連鎖Charcot-Marie-Tooth神經(jīng)病變相關(guān)蛋白抗體肌球蛋白ⅠF(MYO1F)ELISA試劑盒
MYO1E ELISA Kit甘氨酰胺核苷酸合成酶抗體肌球蛋白ⅠE(MYO1E)ELISA試劑盒
MYO1D ELISA Kit生長休止特定蛋白2抗體肌球蛋白ⅠD(MYO1D)ELISA試劑盒
MYO1C ELISA KitG蛋白γ11/Gγ11 抗體肌球蛋白ⅠC(MYO1C)ELISA試劑盒
MYO1B ELISA Kit磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體肌球蛋白ⅠB(MYO1B)ELISA試劑盒
MYO1A ELISA Kitγ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶7重鏈抗體肌球蛋白ⅠA(MYO1A)ELISA試劑盒
MTPN ELISA Kit生長激素2/胎盤特異性生長激素抗體肌侵蛋白(MTPN)ELISA試劑盒
SCIN ELISA Kit高爾基體相關(guān)蛋白GM130抗體肌切蛋白(SCIN)ELISA試劑盒
MYPN ELISA Kit胃泌素抑制肽受體抗體肌鈀蛋白(MYPN)ELISA試劑盒
TTN ELISA Kit粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體α抗體肌聯(lián)蛋白(TTN)ELISA試劑盒
Myo ELISA Kit谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶pi基因抗體肌漿球蛋白(Myo)ELISA試劑盒
TNX ELISA Kit接頭蛋白Gab 2抗體肌腱蛋白X(TNX)ELISA試劑盒
TNR ELISA Kit葡萄糖6磷酸酶α/G6Pase-α抗體肌腱蛋白R(shí)(TNR)ELISA試劑盒
TNN ELISA Kit糖磷脂酰肌醇抗體肌腱蛋白N(TNN)ELISA試劑盒
TENM4 ELISA Kit乙二醛酶1抗體肌腱蛋白M4(TENM4)ELISA試劑盒
TENM3 ELISA Kit核呼吸因子2抗體肌腱蛋白M3(TENM3)ELISA試劑盒
TENM2 ELISA Kit腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA1抗體肌腱蛋白M2(TENM2)ELISA試劑盒
TNM ELISA Kit腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA2抗體肌腱蛋白M(TNM)ELISA試劑盒
TNC ELISA Kit胰高血糖素抗體肌腱蛋白C(TNC)ELISA試劑盒
MYOM3 ELISA Kit線粒體甘油3磷酸?;D(zhuǎn)移酶抗體肌間蛋白3(MYOM3)ELISA試劑盒
MYOM2 ELISA Kit磷脂?;嫉鞍拙厶?6抗體肌間蛋白2(MYOM2)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。