組成及試劑配制:
1、副流感病毒通用PCR檢測試劑盒價格酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
副流感病毒通用PCR檢測試劑盒價格 | Parainfluenza Virus(PIV)RTPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進(jìn)行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
素1(CT-1)ELISA試劑盒抗體細(xì)胞周期蛋白A1(CCNA1)ELISA試劑盒
SOCS-3 ELISA Kit載脂蛋白樣蛋白6抗體細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS-3)ELISA試劑盒
SOCS-1 ELISA Kit凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)ELISA試劑盒
cFn ELISA KitA2LD1蛋白抗體細(xì)胞纖維連接蛋白(cFn)ELISA試劑盒
MEPE ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒
CYP21B ELISA Kit芳香乙酰胺脫乙?;缚贵w細(xì)胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISA試劑盒
CYP21A ELISA Kit芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白4抗體細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒
CYP450 ELISA Kit氨基乙二酸半醛脫氫酶磷酸泛酰巰基乙胺轉(zhuǎn)移酶抗體細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒
COX6A1 ELISA Kit賴氨酸酮戊二酸還原酶抗體細(xì)胞色素c氧化酶Ⅵα亞基多肽1(COX6A1)ELISA試劑盒
COX ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域6抗體細(xì)胞色素C氧化酶(COX)ELISA試劑盒
CYC1 ELISA Kit精氨酸酶2抗體細(xì)胞色素C-1(CYC1)ELISA試劑盒
Cyt-C ELISA Kit醛固酮還原酶家族1成員C3抗體細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒
cytb561 ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激素受體細(xì)胞色素凝血酶原(DCP)ELISA試劑盒
MT ELISA Kit銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體褪黑素(MT)ELISA試劑盒
SYP-Ab ELISA Kit水通道蛋白-7抗體突觸泡蛋白抗體(SYP-Ab)ELISA試劑盒
SYP ELISA Kit谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體突觸泡蛋白(SYP)ELISA試劑盒
SYNJ2 ELISA Kitp21活化蛋白激酶ARHG7抗體突觸回蛋白2(SYNJ2)ELISA試劑盒
HAase ELISA Kit磷酸化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體透明質(zhì)酸酶(HAase)ELISA試劑盒
HABP2 ELISA Kit2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白2(HABP2)ELISA試劑盒
HABP ELISA Kit血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒
HAPLN1 ELISA Kit腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體透明質(zhì)酸蛋白聚糖連結(jié)蛋白1(HAPLN1)ELISA試劑盒
HA ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶19抗體透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒
SOD1 ELISA Kit原癌基因AF4蛋白抗體銅鋅-過氧化物岐化酶(SOD1)ELISA試劑盒
CP/CER ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣1蛋白抗體銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒
HOXA3 ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣2蛋白抗體同源框A3(HOXA3)ELISA試劑盒
Hcy ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣3蛋白抗體同型半胱氨酸(Hcy)ELISA試劑盒
Hepc25 ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶20抗體鐵調(diào)素25(Hepc25)ELISA試劑盒
Hepc ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶23抗體鐵調(diào)素(Hepc)ELISA試劑盒
Fe-SOD ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶28抗體鐵-過氧化物岐化酶(Fe-SOD)ELISA試劑盒
FTH ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶32抗體鐵蛋白重鏈(FTH)ELISA試劑盒
Ferritin ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣4蛋白抗體鐵蛋白(Ferritin)ELISA試劑盒
FE ELISA Kit膜粘連蛋白9抗體鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒
CNN1 ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶15型抗體調(diào)寧蛋白1(CNN1)ELISA試劑盒
AZU/HBP ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶2型抗體天青殺素/肝素結(jié)合蛋白(AZU/HBP)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。