ELISA( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )即酶聯(lián)接免疫吸附劑測定，是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70 年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

工作原理

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β)ELISA試劑盒說明書是一種結(jié)合抗原、抗體特異性反應(yīng)和酶對底物高效催化作用的高敏感性免疫學(xué)實驗技術(shù)。ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)，洗滌使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開，再加入酶標記的抗原或抗體，通過反應(yīng)使其結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶含量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。 實驗結(jié)果重復(fù)性差，同樣的操作，OD值上午1.5，下午0.9？ 樣品中所含物質(zhì)種類繁多，經(jīng)常擔(dān)心會干擾待測蛋白檢測？ 樣品只有一點點，做一遍都不夠，更別說設(shè)置復(fù)孔？ 說明書只提供血清血漿稀釋建議，偏偏你要測的這兩種都不是？ OK，現(xiàn)在這些統(tǒng)統(tǒng)不是問題。
 所有elisa試劑盒都經(jīng)過反復(fù)測試，保證結(jié)果重復(fù)性！

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β)ELISA試劑盒說明書產(chǎn)品特點

1、靈敏度高：可檢測濃度低于1.0pg/ml的細胞因子含量，結(jié)果可靠；

2、樣本量少：檢測樣本只需50ul，是珍貴樣本檢測的理想選擇； 3、操作簡便：操作流程簡單明確，且試劑盒包括實驗所有必需試劑； 4、設(shè)備簡單：使用常規(guī)標準化酶標儀檢測（450nm）。 ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化以及酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活 性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體反應(yīng)，洗滌使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物 與液體中的其他物質(zhì)分開，再加入酶標記的抗原或抗體，通過反應(yīng)使其結(jié)合在固相載體上。此時，固相上的酶含量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的 比例。接著加入底物，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。

 ELISA試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域 ?

 免疫酶染色各種細胞內(nèi)成分的定位 ?

 研究抗酶抗體的合成 ?

 檢測微量的免疫反應(yīng) ?

 定量檢測體液中抗原或抗體成份 ?

 本公司憑借多年的免疫學(xué)相關(guān)試劑盒研發(fā)經(jīng)驗，以高靈敏度、高特異性的elisa試劑盒及相關(guān)產(chǎn)品為依托，為客戶提供專業(yè)的ELISA技術(shù)服務(wù)。上海琛藝的技術(shù)服務(wù)人員擁有*的技術(shù)和豐富的經(jīng)驗，根據(jù)客戶需要制定實驗方案，高效、精確地完成ELISA檢測，確保實驗數(shù)據(jù)的準確性，同時提供專業(yè)的數(shù)據(jù)分析。 ?

 高品質(zhì)：憑借多年的生物試劑盒研發(fā)經(jīng)驗，提供高靈敏度、高特異性的ELISA檢測試劑盒； ?

 高質(zhì)量：技術(shù)服務(wù)人員擁有豐富的操作經(jīng)驗和*的技術(shù)，嚴格操作，保證高效、精準地完成檢測； ?

服務(wù)全：根據(jù)客戶實驗要求設(shè)計、制定實驗方案，同時為客戶提供專業(yè)的數(shù)據(jù)分析服務(wù)； ?

 價格低：以*惠的價格為客戶提供較全面的服務(wù)，幫助客戶有效節(jié)約科研經(jīng)費； ?

時間短：擁有全套檢測設(shè)備和專業(yè)實驗平臺，在短的時間內(nèi)為客戶提供服務(wù)。

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β)ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體，根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，選擇不同類型的檢測方法：

常用方法有： ? 間接法 ? 傳染病的診斷等。 ? 雙抗體夾心法 ? 此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP等。 ? 抗原競爭法 ? 小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。 ? 捕獲法 ? 在臨床檢驗中測定抗體IgM 時多采用捕獲包被法。 ELISA檢測技術(shù)服務(wù) 分類 除了以上常見的4種檢測方法外，還有直接法、捕獲包被法、競爭法(測抗體)、ABSELISA法等其他方法

  人Elisa試劑盒載體的物質(zhì)很多，較常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫 活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。在 ELISA 測定過程中，它作為載體和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)。加之它的價格低廉，所以被普遍采用。 ?

 ELISA試劑盒 載體的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應(yīng)板。 ?

 較常用的載體為微量反應(yīng)板，于 ELISA 測定的產(chǎn)品也稱為 ELISA 板，通用的標準板形是 8×12 的 96 孔式。 ?

抗原和抗體 ?

在 ELISA 檢測過程中，抗原和抗體的敏感性以及特異性是決定實驗是否成功的關(guān)鍵因素。要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。 ?

 ELISA 所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。 ? 用于 ELISA 的抗體有多克隆抗體和單克隆抗體。 ?免疫吸附劑 ? 固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。 ? 將抗原或抗體固相化的過程稱為包被（coating）。由于載體的不同，包被的方法也不同。 ? 如以聚苯乙烯 ELISA 板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（較常用pH9.6 的碳酸緩沖液）中，加于 ELISA 板孔中在 4℃過夜，經(jīng)清洗后即可 應(yīng)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過低，固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)*覆蓋，其后加入的血清標本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會部分地吸附于固相載體表面，后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。在這種情況下，如在包被后再用 1％～5％牛血清白蛋白包被一次，可以消除這種干擾，這一過程稱為封閉（blocking）。 包被好的 ELISA 板在低溫可放置一段時間而不失去 其免疫活性 ? 酶和底物 ? ELISA 中所用的酶要求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專一性強、性質(zhì)穩(wěn)定、來源豐富、價格低廉、制備成的酶標抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定，保留其活性部分和催化能力。在受檢標本中不存在與標記酶相同的酶。 ?

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 酶的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存，價格低廉，有色產(chǎn)物易于測定，光吸收高。 ? ELISA 中較常用的酶為辣根過氧化酶（HRP）和從牛腸粘膜或大腸桿菌提取的堿性磷酸酶（AP）。 ? 結(jié)合物 ? 酶標記的抗原或抗體稱為結(jié)合物（conjugate）。 抗原由于化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原，基本上可參考抗體酶標記的方法。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種。 ? 戊二醛交聯(lián)法戊二醛是一種雙功能團試劑，可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過它而偶聯(lián)。戊二醛交聯(lián)可用一步法（如連接 AP）， 也可用二 步法（如連接 HRP）。 ? 過碘酸鹽氧化法只用于 HRP 的交聯(lián)。該酶含 18％碳水化合物，過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化na（NaBH4）中和多余的過 碘酸。酶上的醛根很活潑，可與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成摩爾比例結(jié)合的酶標結(jié)合物 ? 酶反應(yīng)終止液 ? 常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。 ? 加樣 ? 在ELISA中一般有3次加樣步驟，即加標本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡 ? 保溫 ? ELISA檢測 中一般涉及二次反應(yīng)，即加標本后和加結(jié)合物。反應(yīng)的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定的要求，保溫容器是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各 ELISA 板不應(yīng)疊放。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒是金屬的，傳熱容易。如用保溫箱，空濕盒應(yīng)預(yù)先放在其中，以平衡溫度，這在室溫較低時更為重要。加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。如室溫高于 20℃， ELISA 板可避光放在實驗臺上，以便不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應(yīng)。   ? 洗滌 ? 洗滌在 ELISA 實驗中雖不是反應(yīng)過程，但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。 ? ELISA 板的洗滌一般可采用以下方法： ① 吸干孔內(nèi)反應(yīng)液； ② 將洗滌液注滿板孔； ③ 放置 2min，略作搖動； ④ 吸干孔內(nèi)液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。 ? 洗滌的次數(shù)一般為 3～4 次，有時甚至需洗 5～6 次   ? 顯色 ? 顯色是ELISA實驗中后一步溫育反應(yīng)，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色的情況適當縮短或延長反應(yīng)時間，及時判斷。   ? 比色 ? 如陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般可采用目視比色。如用比色計測定結(jié)果，準確性決定于 ELISA 板底的平整與透明度和比色 計的質(zhì)量。   ? 定性測定 ? 定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標本反應(yīng)性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具 定量意義。 人ω干擾素(IFN-ω)Elisa試劑盒定量測定 ? ELSIA 操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。 ? 測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線的的值逐點連接，所得曲線一般呈S 形，其頭、尾部曲線趨于平坦，*較呈直線的分是較理想的檢測區(qū)域。 ELISA檢測技術(shù)服務(wù) ELISA操作注意事項 嚴謹?shù)脑O(shè)計，優(yōu)質(zhì)的試劑盒，正確的操作和良好的檢測設(shè)備是保證ELISA結(jié)果 準確可靠的關(guān)鍵   ? 樣品要求 ? 客戶需提供新鮮或正確保存的待檢測樣本，是液態(tài)類的樣本(細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、血清、血漿、尿液、胸水、腹水、腦脊液等)，樣本量120ul/孔，建議提供足量樣本＞500μl； a) 細胞培養(yǎng)上清：離心去除沉淀，收集上清。 b) 血清、血漿：*提供血漿，一般不加抗凝劑，收集全血后立即離心，若必須使用抗凝劑，建議使用EDTA，避免使用*、檸檬酸溶液。收集血漿后，建議分裝保存，-70℃保存。樣本應(yīng)避免溶血，避免反復(fù)凍融，不接受高脂樣本。 c) 組織勻漿：建議液氮研磨，加入蛋白酶抑制劑。 d) 細胞勻漿：建議加入蛋白酶抑制劑。 ? 客戶需提供待檢測樣本詳細信息：如種屬來源、樣本類型等； ? 客戶需提供ELISA檢測試劑盒，也可由代購； ? 如需制備ELISA檢測試劑盒，需提供原料及詳細信息； ? 運輸要求：參考《ELISA檢測生物送樣要求》，樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。   ? 服務(wù)說明 ? 若因客戶提供ELISA檢測試劑盒原因?qū)е聦嶒炇?，由此造成的損失由客戶承擔(dān)。 ? 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔(dān)。 ? 因科學(xué)實驗的不確定性，實驗結(jié)果不一定會出現(xiàn)陽性結(jié)果，我們保證實驗結(jié)果的真實準確性，但是對結(jié)果是否符合預(yù)期不做承諾。   保存條件：       標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。 注意事項：       由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。       洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。       為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。       TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。       加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。       由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。       充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。       本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致終檢測到的吸光度顯著下降。       洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。       檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。       加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。 人ω干擾素(IFN-ω)Elisa試劑盒于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。       為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。