胚胎細(xì)胞融合儀器CF-150B核移植是將細(xì)胞核從供體轉(zhuǎn)入受體的過程。細(xì)胞核指導(dǎo)胚胎的發(fā)育,導(dǎo)致新生體安全出生。在這個(gè)過程中,電融合用于將供體細(xì)胞與受體卵細(xì)胞融合,并進(jìn)一步激活細(xì)胞分裂,形成胚胎。Meng等人(1997)將核移植技術(shù)擴(kuò)展至靈長類動(dòng)物模型,克隆出恒猴。技術(shù)的進(jìn)步使研究人員能夠從分裂球進(jìn)展至更高分化的胚胎細(xì)胞以及靜止的胚兒細(xì)胞,作為核的供應(yīng)來源。胚胎產(chǎn)生的細(xì)胞在體外培養(yǎng)6-13代,然后在轉(zhuǎn)入前使用血清饑餓的方法使細(xì)胞靜止。
胚胎細(xì)胞融合儀器CF-150B如前文所述,Roble、Cibelli以及Stice是**次在1998年報(bào)告使用非老化胚成纖維細(xì)胞作為核的供體進(jìn)行核移植而產(chǎn)生綿羊克隆轉(zhuǎn)基因牛的人。IanWilmut在1996年震驚了整個(gè)世界,他從成年的細(xì)胞產(chǎn)生出**個(gè)動(dòng)物克隆——多利。使用分化的成年細(xì)胞進(jìn)行克隆的能力打開了核移植廣泛運(yùn)用的大門即基因**的令人激動(dòng)的模式。*近的成功事例PPLTherapeutics公司從成年體細(xì)胞克隆出豬。對于這些用途可以使用多種細(xì)胞融合樣品池及微型載玻片。
細(xì)胞融合儀
CF-150B胚胎細(xì)胞融合儀器和相關(guān)電極槽(GSS-250)專為哺乳動(dòng)物胚胎分裂球電融合而設(shè)計(jì),可在電解液或非電解液中運(yùn)用。一個(gè)適當(dāng)導(dǎo)向的短電脈沖施加在早期胚胎可以溶解細(xì)胞膜,從而完成細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核融合。此儀器的主要應(yīng)用是產(chǎn)生小鼠四倍體胚胎產(chǎn)生和體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移克隆。標(biāo)準(zhǔn)的雙細(xì)胞分裂期胚胎能夠迅速地融入單個(gè)細(xì)胞(單細(xì)胞分裂期四倍體胚胎)。這種四倍體胚胎可用于與遺傳控制小鼠胚胎干細(xì)胞(ES)聚合,從而產(chǎn)生*的ES衍生細(xì)胞胎兒(Nagyetal.,1990;NagyandRossant;1993)。
隨著ES細(xì)胞遺傳控制技術(shù)的發(fā)展,ES衍生細(xì)胞胚胎有了更廣闊的應(yīng)用空間:
1、應(yīng)用于測試新衍生的或遺傳控制的胚胎干細(xì)胞的發(fā)育潛能(Nagy et al., 1993).
2、*ES衍生細(xì)胞胎兒為不同功能或遺傳研究提供豐富的組織和器官前身資源(Forrester et al. 1991).
3、*近,gene-trap戰(zhàn)略用于*衍生ES胚胎聚合,此胚胎由ES四倍體細(xì)胞胚胎產(chǎn)生,從而獲取基因表達(dá)模式的直接信息CF-150B細(xì)胞融合儀和專業(yè)設(shè)計(jì)的高精度電極槽一起使用。槽有三種不同的縫間隙,250µm,500µm和1000µm,型號名分別為GSS-250,GSS-500和GSS-1000。在做雙細(xì)胞期分裂球融合時(shí),任何一種槽均可使用。如果用于克隆目的,我們*GSS-250。電極材料是高品質(zhì)不銹鋼的,并將其安置在一種厚玻璃中。所有這些材料具有生物安全性,無毒。