冷凍切片技術(shù)的實驗原理與方法！

冷凍切片技術(shù)的實驗原理與方法！

一、實驗?zāi)康?/span>

⒈掌握冷凍切片的方法

⒉掌握冷凍切片的用途

二、實驗原理

冷凍切片是借助低溫使組織凍結(jié)達到一定的硬度并通過冰起支撐作用來進行切片的一種方法。

⒈速凍 可減小冰晶直徑，避免組織細胞損傷。

⒉制冷 壓縮機佛里昂制冷、半導(dǎo)體溫差電制冷

三、實驗材料

新鮮動物肝臟

四、實驗方法

⒈準備 將儀器 打開，樣品臺溫度調(diào)至-40 ℃。

⒉取材 組織必須新鮮，盡可能不經(jīng)水洗。取材時應(yīng)避免組織擠壓，防止人為假象 。樣品大小5X5X3mm。

⒊速凍 將樣品放在樣品臺上，樣品四周加水加固，冷凍5－10min.

⒋切片 升高溫度至-15℃（視樣品而定），約5min后開始切片，厚度6-15um。

⒌制片 將切片直接放在載波片上或先放在盛水（固定液）的培養(yǎng)皿中再轉(zhuǎn)移到載波片上。

⒍染色觀察 吸干水，加一滴蘇木精，加蓋玻片，用顯微鏡觀察。

⒎記錄 將觀察的結(jié)果繪于實驗報告上，整理自己用過的物品。

附：切片溫度的設(shè)定

腦 -12℃

肝臟 -14℃

腎臟 -16℃

肌肉 -20℃

皮膚 -25℃

多脂肪組織 -30℃

經(jīng)過固定的組織 -5℃ ～-10℃

附：快速制 片

1 固定 70％乙醇5～10min；

2 水洗 2min；

3 蘇木精染色 5～10min；

4 脫色 0.1%HCl 至變紅；

5 藍化0.1NaOH 變藍；

6 水洗 5～10s ；

7 脫水 70% 2min ；

8 伊紅染色 5～10min ；

9 脫水 乙醇2minX2；

10 透明 二甲苯 3min；

11 封片 中性樹膠封片。

冷凍切片機的基本操作：

⒈在使用前2小時開啟電源，并將溫度設(shè)定在-25℃;

⒉將適當大小和厚度的標本放在蘑菇狀杯上，加上冷凍蠟，夾在切片機的固定槽內(nèi);

⒊準備好玻片，選擇切片厚度，搖動手柄，即可做成切片;

⒋將做成的切片小心的吸附在玻璃片上;

⒌使用結(jié)束后關(guān)閉電源,清潔腔體和擦干水氣, 做好使用記錄。

⒍為讓水蒸氣蒸發(fā)，請不要馬上關(guān)閉切片機的上蓋移門，應(yīng)到第二天再關(guān)。

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