乳汁體細胞計數(shù)法的操作步驟！

乳汁體細胞計數(shù)法的操作步驟！

百歐博偉生物：體細胞計數(shù)法有直接計數(shù)法和間接計數(shù)法。直接計數(shù)法中簡便易行的方法是直接用顯微鏡進行體細胞計數(shù)（SCC），間接計數(shù)法就是后面提到的CMT法。

一、主要試劑和材料

美藍染色液：美藍乙醇飽和溶液30mL.（美藍2g，95％乙醇100mL），10％氫氧化鈉溶液0.1mL，蒸餾水100mL，將上列溶液混合搖勻，過濾后備用。二甲苯、95％乙醇。生物顯微鏡、載玻片、l0μL。微量加樣器（或移液槍）等。

二、操作方法

⒈涂片制備

涂布：充分搖勻新鮮乳樣，用l0μL微量加樣器吸取中部乳汁l0μL，或用接種環(huán)蘸取等量的乳汁，將乳樣滴于玻片一端中側，仔細涂布成約lcm2。面積的乳膜（為便于操作，可在玻片下墊襯一張硬紙板，紙板上用毛筆劃數(shù)個面積為lcm2的方格透視）。

干燥、脫脂、固定：涂好乳膜的玻片于37℃溫箱中干燥，然后用二甲苯脫脂5min，再置95％乙醇中固定5～10min。

染色：玻片干燥后，用美藍染色液染色5min。水洗，再用95％乙醇脫色數(shù)分鐘，水洗干燥后鏡檢。

鏡檢及計數(shù)：在生物顯微鏡油鏡下觀察（用l0×目鏡，其視野直徑要求為0.016），計數(shù)100個視野內的細胞數(shù)，然后用下式計算：SCC=100xN／Лr2

視野面積Лr2=3.1416×（0.016／2）2。=0.0002cm2，

顯微鏡系數(shù)N=I／0.0002×100=500,000

SCC=系數(shù)×每個視野的細胞平均數(shù)（即細胞總數(shù)÷100）：細胞數(shù)／mL乳。

三、判定標準

隨著和國內乳品行業(yè)的接軌，國內標準也在提高，一般以每毫升牛奶中含20萬個細胞為亞臨床乳房炎的臨界值（+）；超過該值為陽性，低于該值則正常。

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