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上海鼎桑生物科技有限公司一家專(zhuān)注于生命科學(xué)的科技企業(yè)，由在國(guó)內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著豐富從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專(zhuān)營(yíng)進(jìn)口生物試劑，科學(xué)儀器，實(shí)驗(yàn)消耗品等。
公司將不斷把上優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品引入國(guó)內(nèi)市場(chǎng)，滿足客戶的需求，公司也將緊跟生命科學(xué)的發(fā)展，為廣大科研工作者探索生命科學(xué)的奧秘奉獻(xiàn)綿薄之力.
23966上海鼎桑代理
美國(guó)POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生產(chǎn)和經(jīng)營(yíng)LIFE SCIENCES生命科學(xué)（膠體金,不含甲醛的甲醇等），病理學(xué)和顯鏡學(xué) 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產(chǎn)品。polysciences公司是世界上zui大zui全的23966上海鼎桑代理 多聚化合物供應(yīng)商,同時(shí)是世界*的免疫學(xué),組織化學(xué)試劑耗材供應(yīng)商.
上海鼎桑polysciences 23966大量現(xiàn)貨供應(yīng)
轉(zhuǎn)染試劑線性PEI溶液的配制（1mg/ml）
聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI，可用作轉(zhuǎn)染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)證明，分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966轉(zhuǎn)染效率zui高。
下面將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產(chǎn)品特性及其溶液的配制過(guò)程。
1. 產(chǎn)品特性:
產(chǎn)品名稱(chēng)：線性聚乙烯亞胺(PEI)
CAS號(hào) | 9002-98-6，26913-06-4 | 分子式 | (CH2CH2NH)n | 分子量 | 25000 |
熔點(diǎn) | 73-75°C | 外觀 | 白色或黃色固體 | 結(jié)構(gòu)式 |
|
溶解性 | 溶于熱水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；不溶于：苯，aether和丙酮 | 儲(chǔ)存 | 室溫 |
2. 溶液配制
此指導(dǎo)說(shuō)明書(shū)是經(jīng)polysciences公司研究，測(cè)試及其客戶反饋的后編寫(xiě)的。下面推薦一種簡(jiǎn)單適用而的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉(zhuǎn)染試劑的配制。
材料：
1g #23966、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類(lèi)似的生物級(jí)水）、12 M鹽酸、10 M氫氧化鈉、一次性0.1-0.2µm PES真空無(wú)菌過(guò)濾器、無(wú)菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。
器材：
1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準(zhǔn)pH計(jì)、2支1 mL塑料移液管、托盤(pán)、聚四氟乙烯（PTFE）攪拌棒、真空泵
配制過(guò)程：
1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加HCl調(diào)pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪拌3h（直至粉末*溶解）——冷卻至室溫——加NaOH調(diào)pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補(bǔ)足至1L——真空過(guò)濾消毒——分裝，-20°C保存。
備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn)攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。
試劑儲(chǔ)存：
冷凍部分溶液可在-20°C保存長(zhǎng)達(dá)一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反復(fù)凍融。
粉末儲(chǔ)存：
未開(kāi)封的粉末有效期兩年?？稍谑覝叵卤４嬷敝潦褂谩?/font>
轉(zhuǎn)染操作流程：(瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法) 轉(zhuǎn)染效率（部分?jǐn)?shù)據(jù)參考，本數(shù)據(jù)來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，不作為售后投訴依據(jù)）
1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細(xì)
胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置
入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。
2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其
升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適
量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性 PEI 轉(zhuǎn)
染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑滴
加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以
形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14
mL 離心管。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI 復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在
無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴 DNA-PEI 復(fù)
合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加½體積的包含 30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)
染后快 的話7 h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合檢測(cè)時(shí)間。
細(xì)胞種類(lèi) 中文名稱(chēng) PEI 轉(zhuǎn)染效率
HEK293 人胚腎細(xì)胞 90%-95%
293-T 人胚腎細(xì)胞 90%-95%
CHO-K1 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 80%-90%
U251 人源神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 80%-90%
Hela 人源宮頸ai細(xì)胞 70%-80%
COS7 猴 SV40 轉(zhuǎn)化腎細(xì)胞 70%-80%
HepG2 人源肝癌細(xì)胞 70%-80%
NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 60%-70%
膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 人源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 60%-70%
Patu8988 人源胰腺癌細(xì)胞 60%-70%
U2OS 人源骨肉瘤細(xì)胞 60%-70%
轉(zhuǎn)染試劑和 DNA 配比數(shù)據(jù)
細(xì)胞型號(hào) 培養(yǎng)基 每孔細(xì)胞數(shù) DNA 的量 轉(zhuǎn)染試劑量 和培養(yǎng)基混合 4-6h
293H DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293FT DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293E DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293F DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
COS7 DMEM 1.5×10
4
0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS
hela DMEM 2×10
4
0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS
Caco2 MEM 3.5×10
4
0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS
BHK21 MEM 2×10
4
0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS
CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10
4
0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS
RAW264.7 DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS
MCF7
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium
pyruvat
2×10
4
0.1µg 0.25µL
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium
pyruvat+10%FBS
SW480 IMDM 3×10
4
0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS
MDCK DMEM 4×10
4
0.6µg 1µL DMEM+10%FBS
CHO-K1 IMDM+Pro 3×10
4
0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS
HepG2 DMEM 3×10
4
0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS
A549 DMEM 2×10
4
0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS
NIH/3T3 DMEM 1.5×10
4
0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS
vero DMEM 3×10
4
0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS
sf9 SIM SF 5×10
4
0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS
