美國(guó)SONICS 超聲波細(xì)胞破碎儀 VCX130:用于小批量應(yīng)用的超聲波液體處理器,130瓦特超聲處理器與定時(shí)器和脈沖器安全地處理廣泛的有機(jī)和無(wú)機(jī)材料，從150微升到150毫升。典型的應(yīng)用包括生物技術(shù)和制藥加工，包括混合、分散和樣本準(zhǔn)備使用。
◆能量監(jiān)視器
◆1-59秒獨(dú)立開(kāi)/關(guān)脈沖發(fā)生器
◆數(shù)字電表
◆經(jīng)過(guò)時(shí)間指標(biāo)
◆十小時(shí)計(jì)時(shí)器
◆可變功率輸出控制
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
1、了解超聲細(xì)胞破碎的基本原理
2、掌握超聲細(xì)胞破碎的基本技術(shù)
實(shí)驗(yàn)原理
強(qiáng)聲波作用溶液時(shí)，氣泡產(chǎn)生、長(zhǎng)大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān)，空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。
材料和試劑
細(xì)菌10ml、燒杯、刨冰、75％酒精棉球。
| 探頭型號(hào)大小 | 破碎細(xì)胞容量 |
| 2mm | 150ul－5ml |
| 3mm | 250ul－10ml |
| 6mm | 10ml－50ml |
| 型號(hào) | VCX 130 |
| 頻率 | 20KHz |
| 功率 | 130W |
| 定時(shí)裝置 | 1s-10hr |
| 脈沖激發(fā)裝置 | Off：手觸式 On：1-59秒可調(diào) |
| 變頻器型號(hào) | CV18 |
| 標(biāo)配變幅桿 | Φ6mm |
| 標(biāo)配變幅桿長(zhǎng)度 | 113mm |
| 變幅桿整體尺寸 | 115 x 250 x 320 mm |
| 變幅桿材質(zhì) | 鈦合金Ti-6Al-4V |
| 標(biāo)配變幅桿處理能力 | 10ml至50ml |
| 可選變幅桿 | Φ2mm,Φ6mm |
| 變幅桿重量 | 340g |
| 變幅桿電纜長(zhǎng)度 | 1.5m |
| 占空比 | 1-99% |
| 功率調(diào)節(jié)范圍 | 連續(xù)可調(diào)（20-130w） |
| 溫度保護(hù)設(shè)定 | / |
| 功率振幅顯示 | 有 |
| 工作頻率范圍 | 能量監(jiān)視器數(shù)字式瓦特計(jì)自動(dòng)調(diào)諧自動(dòng)振幅補(bǔ)償 |
| 工作模式 | 間隙/連續(xù) |
| 電源 | 220/110V 50Hz/60Hz或者 除非有其他要求，否則電要求以117V、50/60Hz發(fā)送 |
| 凈重 | 3.2kg |
| 主機(jī)+換能器重量 | 3340g |
| 超聲波發(fā)生器 | 一臺(tái) |
| 隔音箱 | 選購(gòu) |
| 電源線 | 一根 |
| 工具箱 | 一套 |
| 破碎杯 | 選購(gòu) |
| 使用說(shuō)明書(shū) | 一份 |
細(xì)胞破碎的方法:
一、機(jī)械破碎法：是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器 等將細(xì)胞破碎開(kāi)來(lái) 。
1. 高速組織搗碎：將材料配成稀糊狀液，放置于筒內(nèi)約1/3體積，蓋緊筒蓋，將調(diào)速器先撥至慢處，開(kāi)動(dòng)開(kāi)關(guān)后，逐步加速至所需速度。此法適用于動(dòng)物內(nèi)臟組織、植物肉質(zhì)種子等。
2. 玻璃勻漿器勻漿：先將剪碎的組織置于管中，再套入研桿來(lái)回研磨，上下移動(dòng)，即可將細(xì)胞研碎，此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高，適用于量少和動(dòng)物臟器組織。
二、物理破碎法：指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎開(kāi)來(lái)。
1：用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂(借助超聲的震動(dòng)力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器）。
機(jī)制：可能與強(qiáng)聲波作用溶液時(shí)，氣泡產(chǎn)生、長(zhǎng)大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān)，空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。
超聲波破碎的效率取決于聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度和細(xì)胞類型等。（使用時(shí)注意降溫，防止過(guò)熱）。
2. 高壓破碎：細(xì)胞懸浮液從高壓室的環(huán)狀隙噴射到靜止的撞擊環(huán)上，被迫改變方向經(jīng)出口管流出。此過(guò)程中細(xì)胞經(jīng)歷了高速造成的剪切的碰撞及高壓到常壓的變化，從而破碎釋放內(nèi)含物。
這是一種溫和的、*破碎細(xì)胞的較理想的方法。
3. 反復(fù)凍融法：將細(xì)胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復(fù)幾次，由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。
三、化學(xué)破碎法：指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變 。
有些動(dòng)物細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉（SDS）、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。
四、酶學(xué)破碎法 ：選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開(kāi)來(lái)。
細(xì)菌細(xì)胞壁較厚，可采用*處理效果更好。
裂解液標(biāo)準(zhǔn)配方: ：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml*。(*在這個(gè)pH范圍內(nèi)比較好發(fā)揮作用) 。
綜合敘述：無(wú)論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞，都會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中，使大分子生物降解，導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少，加入二異丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或減慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，而且應(yīng)該在破碎的同時(shí)多加幾次；另外，還可通過(guò)選擇pH、溫度或離子強(qiáng)度等，使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取。
使用前注意事項(xiàng)：
1．根據(jù)所處理的樣本體積選擇適當(dāng)探頭，使用前后均須用酒精棉球擦洗探頭，換探頭須剛扳手更換；
2．AMPLITUDE旋鈕打開(kāi)時(shí)，探頭不得在空氣中暴露，特殊情況下(測(cè)試探頭)不應(yīng)超過(guò)10秒；
3．使用前準(zhǔn)備好冰盒，樣品處理時(shí)必須置于冰浴中，樣品濃度不可過(guò)大。
