【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】
非洲豬瘟PCR試劑盒基于硅膠吸附柱核酸純化技術(shù)，適用樣本為全血、血清和拭子(包括*、口腔拭子、環(huán)境取樣拭子等)，僅需裂解-過柱-洗滌-洗脫四個(gè)步驟即可獲得高濃度、高純度的DNA，無蛋白質(zhì)污染。本試劑盒提取效率高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，操作方便、快捷。
用戶需自備的試劑為無水乙醇或95%以上的科研酒精。
非洲豬瘟PCR試劑盒【產(chǎn)品內(nèi)容】
產(chǎn)品組成規(guī)格使用說明
溶液1-蛋白酶K1 mL
溶液222 mL
溶液310 mL使用前加入15mL無水乙醇
溶液45 mL使用前加入20mL無水乙醇
溶液54 mL
DNA吸附柱50支
收集管2mL50支
離心管 1.5mL50支
【使用前注意事項(xiàng)】
1. 溶液3在使用前需加入15mL無水乙醇并充分混勻。
2. 溶液4在使用前需加入20mL無水乙醇并充分混勻。
3. 需自備若干離心管，本試劑盒提供的50支1.5mL離心管僅用于收集提取的DNA溶液。
4. 以下操作如非指明，均在室溫下進(jìn)行。
5. 本試劑盒贈(zèng)送1支15mL的量取乙醇用管，所有使用無水乙醇的步驟均可用95%以上的科研酒精替代。
6. 離心機(jī)于8000 rpm運(yùn)行時(shí)，離心力應(yīng)大于1400g;使用掌上離心機(jī)時(shí)，需將離心時(shí)間延長(zhǎng)至1min。
【操作步驟】
1. 全血、血清樣本：在1.5mL離心管中加入200μL樣本。
拭子樣本： 將1個(gè)拭子置于離心管中，加入400μL無菌生理鹽水，充分渦旋后，取200μL溶液置于1.5mL離心管中。
2. 加入20μL蛋白酶K，渦旋或顛倒混合均勻，56℃孵育10min。(無加熱設(shè)備的情況下可于室溫靜置孵育15min)
3. 加入400μL溶液2，渦旋或顛倒混合均勻，56℃孵育5min。(無加熱設(shè)備的情況下可于室溫靜置孵育5min)
注意：當(dāng)樣本為全血時(shí)，靜置5min后請(qǐng)于12000rpm離心2min，吸取上清至另一離心管。不產(chǎn)生沉淀的血清和拭子樣本可省略離心步驟。
4. 加入200μL無水乙醇，渦旋或顛倒混合均勻。
5. 將DNA吸附柱置于收集管中，將上述溶液全轉(zhuǎn)移到DNA吸附柱中，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
6. 向DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液3，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
注意：初次使用前需向溶液3瓶中加入15mL的無水乙醇，并充分振蕩混勻。
7. 將DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液4，8,000 rpm離心30s，棄濾液。
注意：初次使用前需向溶液4瓶中加入20mL的無水乙醇，并充分振蕩混勻。
8. 將DNA吸附柱重新放回收集管中，8,000 rpm空轉(zhuǎn)離心30s，棄濾液。將吸附柱打開置于室溫5分鐘，以*晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR 等)。
9. 將DNA吸附柱置于新的1.5mL離心管中， 向吸附柱柱膜*上方小心加入50μL 溶液5(此步驟請(qǐng)謹(jǐn)慎操作，槍頭請(qǐng)勿接觸柱膜)，8,000 rpm離心30s，洗脫液即為DNA溶液。
注意：洗脫體積不應(yīng)少于30μL，體積過小影響回收效率。DNA溶液請(qǐng)置于-20℃冰箱中保存，避免反復(fù)凍融。
【規(guī)格】 50次/盒
【貯藏及有效期】室溫(15-25℃)保存，有效期12個(gè)月。
